DNA提取过程中所用到的主要设备有哪些?他们各自使用的注意事项是什么?
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/15 15:21:34
DNA提取过程中所用到的主要设备有哪些?他们各自使用的注意事项是什么?
DNA提取过程中所用到的主要设备有哪些?他们各自使用的注意事项是什么?
DNA提取过程中所用到的主要设备有哪些?他们各自使用的注意事项是什么?
一:人体DNA的简易提取法
★所需的材料:①一茶匙盐,放进一杯水(自来水即可,绝对不能有杂质)里完全溶解、②一个干净的小玻璃杯、③一些洗涤液(去超市买正规的)、④一根滴管(可在化学品试剂店买)、⑤酒精度在50°以上的冰镇烈性酒(桶酿燕麦威士忌、质量上乘的杜松子酒、高度伏特加酒,或者抗菌酒精都能实现这项工作) ★制取方法:在干净的小玻璃杯里放入一茶匙洗涤液并用三茶匙水(自来水即可,绝对不能有杂质)稀释.用盐水在嘴里用力漱洗30秒钟左右,然后吐进稀释的洗涤液之中.用力搅拌混合物几分钟,然后非常小心地把两茶匙冰镇烈酒顺着玻璃杯的侧壁倒进去.如果你的手不能拿稳,可以使用滴管,把杯子稍微倾斜一下会对此有所帮助.这个步骤要求注意力非常集中,而且是非常关键的一步,必须要形成一个泾渭分明的水和酒之间的界限.如果你做到了细心谨慎,就将在盐和漱口水混合液的顶部形成单独的一层;等几分钟之后,你就会看到在酒之中开始形成纺锤形、白色、线状的团块样物质.这就是你的DNA.接下来如果有条件的话,可用1280倍的显微镜观察…… ★注意事项:在开始之前,一定要保证你的口腔是干净的.如果刚吃完东西,要等4个多小时后才能提取,以确保提取的精度.
二:动物DNA的简易提取法
(略为复杂一些) ★所需的材料:①鸡血细胞液5~10毫升(后面有鸡血细胞液的制作方法)、②铁架台、③铁环、④镊子、⑤三角架、⑥酒精灯、⑦石棉网、⑧载玻片(可在化学品试剂店买)、⑨玻璃棒、⑩滤纸、⑾滴管(化学品试剂店买)、⑿量筒(100ml一个)、⒀烧杯(100ml一个,50ml和500ml各2个)、⒁试管(20ml2个)、⒂漏斗(建议买3个)、⒃试管夹(建议买4个)、⒄纱布(建议买4个)、⒅体积分数为95%的酒精溶液(就是浓度为95%的酒精,实验前置于冰箱内冷却24小时,建议冷藏室的温度调节在4°~6°之间最好)、⒆蒸馏水(不少于500毫升)、⒇质量浓度为0.1%克/ml(毫升)的柠檬酸钠溶液、(21)物质的量浓度为2mol(摩尔)/L(升)和0.015mol/L的氯化钠溶液、(22)二苯胺试剂(本试剂是成瓶的). ★制取方法:①制备鸡血细胞→取刚杀过的鸡血(要干净,不能有杂质)50毫升左右,加入柠檬酸钠防止凝血;除去上面的清液,因为DNA主要存在于细胞核中.②提取核物质→加蒸馏水(一般是鸡血细胞的2倍半)并用玻璃棒搅拌不少于5分钟,使血细胞破裂,释放出的DNA往往和蛋白质结合在一起.③溶解核内DNA→DNA在高浓度的氯化钠溶液中溶解度很高,用2mol/L的氯化钠溶液可以加速核蛋白解聚,游离出DNA.④析出含DNA的粘稠物→加蒸馏水降低氯化钠溶液的浓度至0.14mol/L,此时DNA的溶解度下降,蛋白质的溶解度增高,从而使DNA和蛋白质分离,析出DNA(注意:此步骤要精确浓度).⑤滤出含DNA的粘稠物→用纱布过滤得到丝状DNA的粘稠物.⑥DNA粘稠物再溶解→加入2mol/L的氯化钠溶液后,充分搅拌,使DNA溶解.⑦过滤含DNA的氯化钠溶液→用新纱布过滤.⑧提取较纯净的DNA→加入冷却的浓度为95%的酒精,使DNA沉淀、浓缩、形成含杂质较少的白色丝状物.⑨DNA的鉴定→DNA的鉴定可用二苯胺法,DNA遇到二苯胺变为蓝色;还可以用“甲基绿”法,“甲基绿”使DNA变为蓝绿色. ★注意事项:①盛放鸡血细胞的容器,最好是塑料容器.鸡血细胞破碎后,DNA容易被玻璃容器吸附.因此,实验中最好使用塑料的烧杯和试管,可以减少提取过程中DNA的损失.②实验中搅拌含有悬浮物的溶液时,玻璃棒不要直插烧杯底部,同时搅拌要轻慢.③用“甲基绿”法鉴别DNA时,可将“甲基绿”直接滴到玻璃棒的丝状物上后,要用水充分冲洗掉浮色后再观察.
三:植物DNA的简易提取法
(提取时千万要注意里面的步骤!) ★所需的材料:①新鲜菜花(或蒜黄、菠菜).②塑料烧杯一个.③量筒(规格和数量同上).④玻璃棒一个.⑤尼龙纱布(数量同上).⑥陶瓷研钵一个(最好用陶瓷的).⑦试管(数量同上,没标明数量的要同时准备两个,以备用).⑧试管架(数量同上)⑨试管夹(数量同上).⑩漏斗(数量同上).⑾酒精灯一个.⑿石棉网(数量同上).⒀三角架.⒁火柴一把(小火柴).⒂刀片一把(小刀即可).⒃天平.⒄研磨液(可在化学品试剂店买).⒅体积为95%的酒精溶液(体积就是浓度).⒆二苯胺试剂一瓶.⒇蒸馏水(不少于500毫升).(21)塑料离心机一台(也可用食品加工机代替). ★制取方法:①准备材料→将新鲜菜花和浓度为95%的酒精溶液放入冰箱冷冻室内,至少24个小时,建议48个小时,冷冻室的温度要调成-18°以下.②取材→称取30克菜花,去梗取花,切碎.③研磨→将碎菜花放入研钵内,倒入10毫升研磨液,充分研磨10分钟,建议15分钟.④过滤→在漏斗中垫上尼龙纱布,将菜花研磨液滤入烧杯中(有条件的可将滤液滤入塑料离心机中离心,用1000转/分钟的速度旋转,离心5分钟,取出上面的清澈液体放入烧杯中.[也可用食品加工机代替,但速度一定要有保证!])在4°的冷藏室中放置5~6分钟后,再取上面的清澈液体.⑤加冷酒精→将一倍体积的清澈液体倒入两倍体积浓度为95%的冷酒精中,并用玻璃棒缓缓地轻轻地搅拌溶液(玻璃棒不要插入烧杯底部).沉淀3~5分钟后,可见白色的DNA絮状物出现.用玻璃棒缓缓旋转,絮状物会缠在玻璃棒上.⑥配制二苯胺试剂→取0.1毫升B液,滴入到10毫升A液中,混匀.⑦鉴定→取4毫升DNA提取液放入试管中,加入4毫升二苯胺试剂,混匀后观察溶液颜色(不变蓝).用沸水浴(100°)加热10分钟.在加热过程中,随时注意试管中溶液颜色的变化(逐渐出现浅蓝色). ★注意事项:①一定的冷冻时间是绝对要掌握好的,因为植物的DNA提取不易.②研磨的时间也要掌握好,理由同前.③要想好一切步骤,一举呵成,就是要抓紧时间,理由同前.