求酶联免疫吸附法(ELISA)核小体测定,具体流程,要具体最好说明用哪个牌子的试剂,就是想测定细胞耐药性,看滴了药,不同浓度,死的量哪个多,听说拿ELISA法最简单,所以求具体步骤,试剂型号.好心
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/16 12:38:44
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操作步骤
1.\x05标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释.
160U/L\x055号标准品\x05150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
80 U/L\x054号标准品\x05150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
40 U/L\x053号标准品\x05150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
20 U/L\x052号标准品\x05150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
10 U/L\x051号标准品\x05150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2.\x05加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔.在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）.加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀.
3.\x05温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟.
4.\x05配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.\x05洗涤：小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干.
6.\x05加酶：每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外.
7.\x05温育：操作同3.
8.\x05洗涤：操作同5.
9.\x05显色：每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
10.\x05终止：每孔加终止液50μl,终止反应（此时蓝色立转黄色）.
11.\x05测定：以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）.测定应在加终止液后15分钟以内进行.
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度.
注意事项
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存.
2．浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果.
3．各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差.一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样.
4．\x05请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔.如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值）,请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数（×n×5）.
5．\x05封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染.
6．底物请避光保存.
7．严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理.
9．本试剂不同批号组分不得混用.
10.如与英文说明书有异,以英文说明书为准.
保存条件及有效期
1．试剂盒保存：；2-8℃.
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