怎么用实验鉴定中药抗大肠杆菌
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/18 19:44:17
怎么用实验鉴定中药抗大肠杆菌
怎么用实验鉴定中药抗大肠杆菌
怎么用实验鉴定中药抗大肠杆菌
1 材料与方法
1.1 材料
中药：侧柏叶、大蓟、艾叶、石菖蒲、夏枯草、黄芩购自广西一心药业百色连锁店.菌种：耐药性大肠杆菌由右江民族医学院微生物学教研室分离、鉴定、保存.大肠杆菌经青霉素和红霉素的标准药敏纸片（购自杭州天和生物有限公司）测定为耐药.试剂：M-H培养基、NS购自杭州天和生物有限公司.其他材料：滤纸、培养皿、棉签等购自杭州天和生物有限公司.
1.2 方法
1.2.1 煮沸法提取药液［2,3］
6味中草药各50g分别加水过药面,文火煎煮,煎煮时间第1次为1.5h,第2次为40min,第3次为30min.将3次药液合并后浓缩为100ml（相当于0.5g/ml生药）,再取第1次浓缩液10ml,将其浓缩为5ml的2次浓缩液(相当于1.0g/ml生药）.将2次浓缩液备用.
1.2.2 自制药敏纸片
制作直径6mm的滤纸纸片,高压灭菌后烘干,然后把滤纸片浸泡于浓缩液中过夜,60℃烘干箱烘干,无菌保存备用.
1.2.3 K-B法药敏试验［4］
①按每1000ml蒸馏水称取Muller-hinton Agar 38g配备M-H琼脂,按每个平皿(直径9mm)25ml进行分装.②将孵育16～24h的菌种分别接种于生理盐水试管中,校正浓度至0.5麦氏标准(相当于1.0×108CFU/ml).③用无菌棉签蘸取菌液,在试管内壁旋转挤去多余菌液后在M-H琼脂表面均匀涂布接种3次,每次旋转平板60°,最后沿平板内缘涂抹1周.④平板在室温下干燥3～5min后用无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面,置35℃孵育16～18h,记录抑菌圈的直径.⑤药敏实验重复3次,以 3次平均值为该味药的抑菌直径.
1.2.4 观察结果
观察6种中药提取物在体外对耐药性大肠杆菌的抑菌效果.
2 结果
K-B法测定不同浓度6味中药水煮物对耐药性大肠杆菌的抑菌情况：夏枯草、黄芩两味中药在浓度0.5g/ml时有抑菌作用,其他4味中药无抑菌作用；浓度在1.0g/ml时6味中药均有不同程度的抑菌作用,但夏枯草、黄芩两味中药抑菌作用特别明显,见表1.表1 K-B法测定不同浓度6味中药水提物对耐药性大肠杆菌的抑菌直径(略)