qRT-PCR检测植物miRNA的表达量,内参基因选择什么最好?可以给出特意反转录引物和qRT-PCR的引物吗?文献提到U6作为内参基因,但是发现U6的种类也有很多,应该怎么选择?U6保守性高吗?不同植物的引
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/24 20:18:56
qRT-PCR检测植物miRNA的表达量,内参基因选择什么最好?可以给出特意反转录引物和qRT-PCR的引物吗?文献提到U6作为内参基因,但是发现U6的种类也有很多,应该怎么选择?U6保守性高吗?不同植物的引
qRT-PCR检测植物miRNA的表达量,内参基因选择什么最好?可以给出特意反转录引物和qRT-PCR的引物吗?
文献提到U6作为内参基因,但是发现U6的种类也有很多,应该怎么选择?U6保守性高吗?不同植物的引物可以通用吗?比如苔藓植物的和被子植物的U6引物可以通用吗?
如果用茎环法反转录miRNA，miRNA特意反转录引物和内参特异反转录引物加在同一个反应管内吗，可行性多大？有没有相关文献？假如可以加在同一管反转录，那么接下来qRT-PCR的miRNA和U6的正反引物加在同一管还是分开进行？
qRT-PCR检测植物miRNA的表达量,内参基因选择什么最好?可以给出特意反转录引物和qRT-PCR的引物吗?文献提到U6作为内参基因,但是发现U6的种类也有很多,应该怎么选择?U6保守性高吗?不同植物的引
我知道和使用过的U6内参基因只有两个：RNU6-1和RNU6-2.前一个就是常见的u6,后一个有时被称为u6b.在我的大鼠RNA样本当中,u6表达量有些太高,u6b的Cq值与我的目标miRNA比较接近,稳定性也很好.但是这些对植物样本中的内参基因选择没有什么指导意义.
为了确定u6在植物中的保守性,比较快捷的办法是找到谈论这个话题的文献综述.如果没有人写过这样的综述的话,就只能靠自己去数据库找到所有序列自己对比了.
关于内参基因的选择,必须实验确定特定样本中的表达水平稳定,其他文献中报导的内参基因不一定适合你的样本.做新的课题时,选择内参基因一般是选取3-5个常用的,PCR测试后选取.
这里有applied biosystem一篇非常好的文章讨论内参基因,里面有很多建议和备选,但都是人和小鼠中测试的.我贴链接不方便,麻烦你自己把点和斜换成标点以后使用：
www3点appliedbiosystems点com斜cms斜groups斜mcb_marketing斜documents斜generaldocuments斜cms_044972点pdf
以上公司的miR PCR是茎环法,也是我使用过的,两个引物不在同一个管内,两个步骤也是完全分开先后进行的.暂时没有看到他们有内参和目标基因在同一反应管进行的miR PCR产品,因为他们的PCR探针都用的同一种荧光.如果楼主感兴趣RT-PCR一步反应的,并且内参能够与目标miR在同一反应体系进行的产品,还要去咨询各大厂商.