RT-PCR 刚刚换了新的mmlv和RRI,其他的oligodt,dntp,taq,引物等试剂都至少半年了.没换新试剂之前做了几次,每次都是marker很清楚,目的条带和内参都没有,每个通道只在100bp位置有条带,就认为是二聚体
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/27 18:00:21
RT-PCR 刚刚换了新的mmlv和RRI,其他的oligodt,dntp,taq,引物等试剂都至少半年了.没换新试剂之前做了几次,每次都是marker很清楚,目的条带和内参都没有,每个通道只在100bp位置有条带,就认为是二聚体
RT-PCR 刚刚换了新的mmlv和RRI,其他的oligodt,dntp,taq,引物等试剂都至少半年了.
没换新试剂之前做了几次,每次都是marker很清楚,目的条带和内参都没有,每个通道只在100bp位置有条带,就认为是二聚体引物.RNA纯度测定结果都在2附近,认为问题可能在反转部分,但是昨天换了新的mmlv和RRI之后,结果还是不理想.做了四个样,同一只小鼠的,1和2是心肌,3和4是肾脏,1和3扩的是目的基因ACE,2和4扩的是GAPDH.跑电泳的结果是marker很清楚,1和3没有任何条带,2和4在100bp附近有一条亮带.这是什么原因啊?我想反转录之后就检测一下有没有cDNA该用什么方法.我该在什么地方找问题呢.
RT-PCR 刚刚换了新的mmlv和RRI,其他的oligodt,dntp,taq,引物等试剂都至少半年了.没换新试剂之前做了几次,每次都是marker很清楚,目的条带和内参都没有,每个通道只在100bp位置有条带,就认为是二聚体
问题很多.
1、你的GAPDH扩增预计多长,因为100bp可不像二聚体;
2、ACE引物设计如何,从哪里获得的?国内文献的引物绝对需要核实,SCI文献来的最好也核实,到ncbi blast一下;
3、可以提取染色体DNA做一个PCR看看做个对照;
4、反转用的什么引物,oligo还是randem,还是特异性的引物?
5、RT-PCR体系要根据实际情况优化的.