RT-PCR 刚刚换了新的mmlv和RRI,其他的oligodt,dntp,taq,引物等试剂都至少半年了.没换新试剂之前做了几次,每次都是marker很清楚,目的条带和内参都没有,每个通道只在100bp位置有条带,就认为是二聚体

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/27 18:00:21
RT-PCR刚刚换了新的mmlv和RRI,其他的oligodt,dntp,taq,引物等试剂都至少半年了.没换新试剂之前做了几次,每次都是marker很清楚,目的条带和内参都没有,每个通道只在100b

RT-PCR 刚刚换了新的mmlv和RRI,其他的oligodt,dntp,taq,引物等试剂都至少半年了.没换新试剂之前做了几次,每次都是marker很清楚,目的条带和内参都没有,每个通道只在100bp位置有条带,就认为是二聚体
RT-PCR 刚刚换了新的mmlv和RRI,其他的oligodt,dntp,taq,引物等试剂都至少半年了.
没换新试剂之前做了几次,每次都是marker很清楚,目的条带和内参都没有,每个通道只在100bp位置有条带,就认为是二聚体引物.RNA纯度测定结果都在2附近,认为问题可能在反转部分,但是昨天换了新的mmlv和RRI之后,结果还是不理想.做了四个样,同一只小鼠的,1和2是心肌,3和4是肾脏,1和3扩的是目的基因ACE,2和4扩的是GAPDH.跑电泳的结果是marker很清楚,1和3没有任何条带,2和4在100bp附近有一条亮带.这是什么原因啊?我想反转录之后就检测一下有没有cDNA该用什么方法.我该在什么地方找问题呢.

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问题很多.
1、你的GAPDH扩增预计多长,因为100bp可不像二聚体;
2、ACE引物设计如何,从哪里获得的?国内文献的引物绝对需要核实,SCI文献来的最好也核实,到ncbi blast一下;
3、可以提取染色体DNA做一个PCR看看做个对照;
4、反转用的什么引物,oligo还是randem,还是特异性的引物?
5、RT-PCR体系要根据实际情况优化的.

RT-PCR 刚刚换了新的mmlv和RRI,其他的oligodt,dntp,taq,引物等试剂都至少半年了.没换新试剂之前做了几次,每次都是marker很清楚,目的条带和内参都没有,每个通道只在100bp位置有条带,就认为是二聚体 在RT-PCR中提到的AMV、MMLV是什么? 为什么Access RT-PCR系统不使用MMLV反转录酶而使用AMV反转录酶? PCR和RT -PCR的区别与联系 电动车刚刚换的新电池为什么跑不远? 为什么煤气灶中间没火,新换的!刚刚换的新煤气灶. [PCR,RT-PCR,质粒构建,求助]PCR的时候用普通Taq酶能P出的东西,为什么换了高保真酶之后,同样的循环条件为什么P不出条带? RT-PCR 的原理 上班族想要学英语,有没有什么建议?我是一个朝九晚五的上班族,刚刚换了新部门.新的工作内容大多是和老外们打交道,想提升英语水平,各位有没有什么好的建议? RT-PCR和巢式RT-PCR的引物有区别吗 普通的RT-PCR 和荧光定量PCR,在反转录这一步是不是一样的?我买的是普通的反转录试剂盒,是不是再增加一个做荧光定量PCR的PCR那一部分就可以了? PCR与RT-PCR的比较 孟德尔遗传定律问题假如说Rr自交,即Rr X Rr. 那么两个Rr都分离得到R和r,如果Rr的R与另一个Rr的r结合后,剩下的r不是只能与另一个Rr剩下的R结合吗?那么后一个过程就不是自由选择的随机过程了 嫁接的基因怎么算用基因型为 rr 的枝条作接穗,成功嫁接到基因型为RR的砧木上,在正常情况下该枝条上结出了果实,判断该果实的基因型是( )A rr B Rr C RR D RR和rr顺便,嫁接的基因型该怎么算, real-time PCR 、quantitative RT-PCR 和absolute quantitative real-time PCR的区别这三种PCR的区别是什么,最好能详细点,第二个是quantitative real-time PCR,再补充一个real-time RT-PCR 我想知道RT-PCR的原理和具体步骤 电瓶车 刚刚换电瓶 是不是要等到 电 没有了才可以充电?如果 换了 电瓶 开了 一半的 电 直接充电了 会不会有什么后果?刚换的 新电瓶啊.没分了、、=有了 会 追的 .刚刚换的 电瓶是 有电的 . rt pcr的引物设计