酶标签去除,HRP（辣根过氧化物酶）标记抗体的原理及操作流程是什么 具体怎么弄

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/27 19:49:09
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HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法.对于制备HRP结合物,可用戊二醛二步法和过碘酸钠法.尤以简易过碘酸钠法更为常用.戊二醛二步法1.原理 戊二醛为一种双功能试剂,通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合,形成酶-戊二醛-免疫球蛋白结合物.2.标记步骤 (1) 称取HRP25mg溶于1.25％戊二醛溶液中,于室温静置过夜.(2) 反应后的酶溶液经Sephadex G-25层析柱,用生理盐水洗脱.流速控制在1ml／1分钟,收集棕色流出液.如体积大于5ml,则以PEG浓缩至5ml.放置25ml小烧杯中,缓慢搅拌.(3) 将待标记的抗体12.5mg用生理盐水稀释至5ml,搅拌下逐滴加入酶溶液中.(4) 用1M PH9.5碳酸缓冲液0.25ml,继续搅拌3?小时.(5) 加0.2M赖氨酸0.25ml,混匀后,置室温2小时.(6) 在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵,置4℃1小时.(7) 3000rpm离心半小时,弃上清.沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次,最后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中.(8) 将上述溶液装入透析袋中,对0.15M PH7.4的PB缓冲盐水透析,去除铵离子后(用萘氏试剂检测),10,000rpm离心30分钟去除沉淀,上清液即为酶结合物,分装后,冰冻保存.…………………… ……………………………… 更多具体材料请参考：酶标签去除 http://product.bio1000.com/100165/

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