计算感受态细胞转化率公式中的稀释倍数指的是哪个的稀释倍数?是指挑菌接种1:100的那个比例吗?转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积 我用的是CaCl2法制备的
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/27 16:36:41
计算感受态细胞转化率公式中的稀释倍数指的是哪个的稀释倍数?是指挑菌接种1:100的那个比例吗?转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积 我用的是CaCl2法制备的
计算感受态细胞转化率公式中的稀释倍数指的是哪个的稀释倍数?
是指挑菌接种1:100的那个比例吗?
转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积
我用的是CaCl2法制备的
计算感受态细胞转化率公式中的稀释倍数指的是哪个的稀释倍数?是指挑菌接种1:100的那个比例吗?转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积 我用的是CaCl2法制备的
转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子,根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率,公式如下:
转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积
转化频率(转化子数/每ug 质粒DNA)=转化子总数/质粒DNA 加入量(ug)
下面以大肠杆菌TG1电转感受态为例给你演示一下:
第一天,上午取大肠杆菌TG1菌液划线平板(一般要48小时以上才能长出单克隆 )
第三天,在长有单克隆的平板上挑一个生长状态好的单克隆接到4ML新鲜培养基,过夜培养
第四天,如你说的,按1:100扩大培养;OD达到0.5-0.6开始制备感受态细胞
制备好的感受态细胞分装到1.5EP管中,一般为100UL每管
感受态效价的测定:
转0.1ng标准质粒到100ul的感受态细胞中----1.5KV电压电击----37度培养1小时----稀释 涂布
所谓的“稀释倍数”是指这的稀释
一般情况下TG1电转感受态的效价(即转化频率)在10^8--10^9
所以反推预测,我们一般会稀释10^-2---10^-3梯度来涂布.
如果涂布50ul,假设在10^-2板上N个菌落,
套公式:
转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积/涂板菌液体积
转化子总数=N×10^2×100/50=2N×10^2
转化频率(转化子数/每ug 质粒DNA)=转化子总数/质粒DNA 加入量(ug)
转化频率=2N×10^2/10^-4(0.1ng=10^-4ug)
=2N×10^6
你自己推算一遍,如果在10^-3板上Y个菌落的转化频率是否为2Y×10^7.
一样的,只不过是不同方法制备的感受态细胞,一个是电转感受态,你的是化转感受态.计算方法还是相同地.