在纯化蛋白时,如何重复使用柱子及柱料?用his柱纯化的

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/25 19:13:09

在纯化蛋白时,如何重复使用柱子及柱料?用his柱纯化的在纯化蛋白时,如何重复使用柱子及柱料?用his柱纯化的在纯化蛋白时,如何重复使用柱子及柱料?用his柱纯化的那就是ni-NTA的填料,几大厂家的n

在纯化蛋白时,如何重复使用柱子及柱料?用his柱纯化的
在纯化蛋白时,如何重复使用柱子及柱料?
用his柱纯化的

在纯化蛋白时,如何重复使用柱子及柱料?用his柱纯化的
那就是ni-NTA的填料,几大厂家的nta填料都是比较耐碱的,在上轮实验后,可以先用纯水过5-10个柱体积,再用0.5N的NaOH过5个柱体积（15min-30min时间）,再过至少10个柱体积的纯水（确保NaOH清除干净,可用ph试纸查ph至中性）,如果短时间不用,就用20%无水乙醇保柱.
如果是多次使用后发现蛋白挂不上,或填料发白,就说明填料上ni脱落的厉害,需要重生,这就要看你填料的说明书要求,但一般过程是差不多的,你写下,你参考：
（1）过5体积纯水平衡柱子；
（2）过5体积NaOH（0.5N）,15-30min时间；
（3）纯水10体积；
（4）依次10%、20%、50%、70%、90%无水乙醇3体积；
（5）100%无水乙醇5体积；
（6）依次90%、70%、50%、20%、10%无水乙醇3体积；
（7）纯水10体积
（8）EDTA2Na(50nM),这是脱ni,要洗至填料变白；
（9）纯水20体积；
（10）100mM的NiSO4（硫酸镍）,5体积（流速要慢,可多过几个体积）,重新上ni；
（11）纯水10体积；
这就重新挂ni了,填料应该重现微蓝色,可再使用.但就我的经验,一般填料重生3次以上后,其效果就不乐观了,现在ni-nta也不贵,如果实验比较重要,建议使用新填料.
欢迎继续讨论,纯属手打,祝实验顺利!

在纯化蛋白时,如何重复使用柱子及柱料?用his柱纯化的蛋白纯化问题蛋白纯化过程中,用NTA柱纯化的效果不好,杂带还是很多,是柱子填料不好还是什么问题啊? 在纯化蛋白时,镍离子有什么作用?用His柱纯化的在使用柱色谱分离纯化中药成分时如何选择柱子用离子交换法纯化蛋白如何选定缓冲液? 做Ni-NTA树脂纯化蛋白时时没有层析柱怎么办?可以用其他的什么东西代替柱子吗组氨酸标签纯化蛋白挂不上柱子,蛋白的量还挺高的蛋白质纯化洗脱在蛋白质纯化时,用PH2.0的酸性buffer洗脱,为什么不担心蛋白会遇酸沉淀蛋白G纯化为什么在洗脱和平衡的时候分别出现一个波峰最近接到订单,要求proG纯化,在用PH2.5甘氨酸洗脱时出现一个波峰,在洗脱完以后用binding buff 缓冲液平衡柱子的时候又出现了一个波峰,有已知肝细胞有一种蛋白,知其等电点及分子量,如何将此蛋白纯化下来? 纯化少量蛋白后如何浓缩蛋白纯化时忘了把镍柱再生怎么办蛋白纯化在分离纯化酶过程中,为什么要不断测定酶活力及酶蛋白含量? 为什么用离心机分离血清时有蛋白血清免疫球蛋白的提取分离、纯化及鉴定蛋白纯化过程中,过完柱子后的上清称为什么? 镍柱纯化蛋白不挂住怎么办求教离子交换柱纯化蛋白的问题