如何用标记基因检测目的基因导入载体我所疑惑的是,标记基因不是在运载体上吗,目的基因的插入对它也不会有影响啊?对三楼提问,既然不影响,那为什么你说检测到标记基因也证明目
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 12:59:16
如何用标记基因检测目的基因导入载体我所疑惑的是,标记基因不是在运载体上吗,目的基因的插入对它也不会有影响啊?对三楼提问,既然不影响,那为什么你说检测到标记基因也证明目
如何用标记基因检测目的基因导入载体
我所疑惑的是,标记基因不是在运载体上吗,目的基因的插入对它也不会有影响啊?对三楼提问,既然不影响,那为什么你说检测到标记基因也证明目的基因导入了?
如何用标记基因检测目的基因导入载体我所疑惑的是,标记基因不是在运载体上吗,目的基因的插入对它也不会有影响啊?对三楼提问,既然不影响,那为什么你说检测到标记基因也证明目
你的题目太笼统,我简言之:
对于细菌而言:
通常标记基因和目的基因都位于一个载体上,标记基因通常为抗生素抗性基因,用含抗生素的平板筛选,长出来的菌落一般都是阳性克隆.也就是:如果检测到了标记基因,就认为目的基因也导入到细菌了.
此外,还可以用蓝白斑筛选(alfa-互补原理),将目的基因插入质粒后,如果有目的基因,则菌落在特定的平板上(通常是假X-GAL 及 IPTG),菌落会呈现白色,而阴性菌落呈蓝色.
对于真核生物,如酵母菌,处用抗生素外,还可以用氨基酸缺陷型平板进行筛选.
对于哺乳动物细胞而言,方法更多:如各种报告基因:荧光蛋白,荧光素酶,抗除草剂基因等等来指示目的基因是否转染到了细胞内.
补充:
当然不会受影响了,存在于同一载体,但是彼此独立.
看你用哪种标记基因啦
一般将载体(不管目的基因是否成功插入)转入宿主细胞(一般是生长繁殖快速的细菌)。
如果是利用某种抗抗生素(如抗青霉素)基因标记,那么就将宿主细胞培养在含青霉素的培养基中。能存活的都是转入成功的。
如果利用荧光基因标记,那么哪些发出荧光那些就是。
如果是利用LacZ,那就是利用蓝白斑筛选试验,白色的就是转入成功的。
也可以通过利用与目的基...
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看你用哪种标记基因啦
一般将载体(不管目的基因是否成功插入)转入宿主细胞(一般是生长繁殖快速的细菌)。
如果是利用某种抗抗生素(如抗青霉素)基因标记,那么就将宿主细胞培养在含青霉素的培养基中。能存活的都是转入成功的。
如果利用荧光基因标记,那么哪些发出荧光那些就是。
如果是利用LacZ,那就是利用蓝白斑筛选试验,白色的就是转入成功的。
也可以通过利用与目的基因碱基互补配对的探针杂交,选择。
收起
将标记基因和目的基因偶联在一起,如果能在转化后的细胞或细菌中检测到标记基因的表达,就可以认定目的基因已导入到受体宿主中。标记基因如耐药基因、绿色荧光蛋白基因等都可以成为标记基因。
用基因探针杂交