求流式细胞仪检测细胞周期的protocol

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/25 01:36:42
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博凌科为生物科技-为你应用:通过流式细胞仪分析各时期的细胞百分数,可检测细胞的增殖、凋亡.原理:通常用PI染细胞核,PI在一定波长的光下发出荧光,其强度与DNA含量成正比.绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白及其它发光基团也可作为标记物,分选细胞.方法:1) 将细胞以1106接种于60mm培养板,80%汇合后转染.2) 24小时后在新鲜培养液中加入适当的抗生素(真核表达载体上的抗性标记)进行培养(该步可选).3) 48-72小时后用胰酶消化收集细胞,PBS洗两遍,弃上清,加入1ml 70%预冷乙醇中,吹打均匀,4℃固定12小时以上.4) PBS洗涤去乙醇,1000rpm,5min,洗两遍.5) 0.5mlPBS重悬细胞,加入PI和 RNaseA至终浓度50g/ml,37℃ 温浴30 min.6) 用流式细胞仪测定周期.PI:碘化丙啶,以PBS配成1mg/ml,4℃保存.RNaseA:10mg/ml