焦磷酸测序技术为什么能正确测定DNA的序列最好有具体的例子和步骤

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/25 14:16:49

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Pyrosequencing是一项全新的DNA测序技术,可以快速、准确地测定一段较短的目标片段.其基本原理如下：
第1步：1个特异性的测序引物和单链DNA模板结合,然后加入酶混合物（包括DNA Polymerase、ATP Sulfurylase、Luciferase和Apyrase）和底物混合物（包括APS和Luciferin）.
第2步：向反应体系中加入1种dNTP,如果它刚好能和DNA模板的下一个碱基配对,则会在DNA 聚合酶的作用下,添加到测序引物的3‘末端,同时释放出一个分子的焦磷酸（PPi）.
第2步图示(图片来自互联网)
第3步：在ATP硫酸化酶的作用下,生成的PPi可以和APS结合形成ATP;在荧光素酶的催化下,生成的ATP又可以和荧光素结合形成氧化荧光素,同时产生可见光.通过CCD光学系统即可获得一个特异的检测峰,峰值的高低则和相匹配的碱基数成正比.
第3步图示(图片来自互联网)
第4步：反应体系中剩余的dNTP和残留的少量ATP在Apyrase的作用下发生降解.
第4步图示(图片来自互联网)
第5步：加入另一种dNTP,使第2-4步反应重复进行,根据获得的峰值图即可读取准确的DNA序列信息.
第4步图示(图片来自互联网)
Pyrosequecing技术操作简单,结果准确可靠,可应用于SNP位点检测、等位基因频率测定、细菌和病毒分型等领域.

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