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来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/25 04:06:07
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什么是液相化学
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系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成.储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来高效液相色谱仪主要有进样系统、输液系统、.分离系统、检测系统和数据处理系统,下面将分别叙述其各自的组成与特点. 1.进样系统 液相色谱仪 一般采用隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作,进样量是恒定的.这对提高分析样品的重复性是有益的. 2.输液系统 该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分.高压泵的一般压强为l.47~4.4X107Pa,流速可调且稳定,当高压流动相通过层析柱时,可降低样品在柱中的扩散效应,可加快其在柱中的移动速度,这对提高分辨率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的.流动相贮存错和梯度仪,可使流动相随固定相和样品的性质而改变,包括改变洗脱液的极性、离子强度、PH值,或改用竞争性抑制剂或变性剂等.这就可使各种物质(即使仅有一个基团的差别或是同分异构体)都能获得有效分离. 3.分离系统 该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等.色谱柱一般长度为10~50cm(需要两根连用时,可在二者之间加一连接管),内径为2~5mm,由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成,住内装有直径为5~10μm粒度的固定相(由基质和固定液构成).固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成,它们都有惰性(如硅胶表面的硅酸基因基本已除去)、多孔性(孔径可达1000?)和比表面积大的特点,加之其表面经过机械涂渍(与气相色谱中固定相的制备一样),或者用化学法偶联各种基因(如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等)或配体的有机化合物.因此,这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性.例如,在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素(PSA)后,就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分离出来. 另外,固定相基质粒小,柱床极易达到均匀、致密状态,极易降低涡流扩散效应.基质粒度小,微孔浅,样品在微孔区内传质短.这些对缩小谱带宽度、提高分辨率是有益的.根据柱效理论分析,基质粒度小,塔板理论数N就越大.这也进一步证明基质粒度小,会提高分辨率的道理. 再者,高效液相色谱的恒温器可使温度从室温调到60C,通过改善传质速度,缩短分析时间,就可增加层析柱的效率. 气相色谱仪的基本构造有两部分,即分析单元和显示单元.前者主要包括起源及控制计量装 置﹑进样装置﹑恒温器和色谱柱.后者主要包括检定器和自动记录仪.色谱柱(包括固定相)和检定器是气相色谱仪的核心部件 色谱仪利用色谱柱先将混合物分离,然后利用检测器依次检测已分离出来的组分.色谱柱的 气相色谱仪 直径为数毫米,其中填充有固体吸附剂或液体溶剂,所填充的吸附剂或溶剂称为固定相.与固定相相对应的还有一个流动相.流动相是一种与样品和固定相都不发生反应的气体,一般为氮或氢气. 待分析的样品在色谱柱顶端注入流动相,流动相带着样品进入色谱柱,故流动相又称为载气.载气在分析过程中是连续地以一定流速流过色谱柱的;而样品则只是一次一次地注入,每注入一次得到一次分析结果. 样品在色谱柱中得以分离是基于热力学性质的差异.固定相与样品中的各组分具有不同的亲合力(对气固色谱仪是吸附力不同,对气液分配色谱仪是溶解度不同).当载气带着样品连续地通过色谱柱时,亲合力大的组分在色谱柱中移动速度慢,因为亲合力大意味着固定相拉住它的力量大.亲合力小的则移动快.4根柱管实际上是一根,只是用来表示样品中各组分在不同瞬间的状态.样品是由A、B、C3个组分组成的混合物.在载气刚将它们带入色谱柱时,三者是完全混合的,如状态(Ⅰ).经过一定时间,即载气带着它们在柱中走过一段距离后,三者开始分离,如状态(Ⅱ).再继续前进,三者便分离开,如状态(Ⅲ)和(Ⅳ).固定相对它们的亲合力是A>B>C,故移动速度是C>B>A.走在最前面的组分 C首先进入紧接在色谱柱后的检测器,如状态(Ⅳ),而后A和B也依次进入检测器.检测器对每个进入的组分都给出一个相应的信号.将从样品注入载气为计时起点,到各组分经分离后依次进入检测器,检测器给出对应于各组分的最大信号(常称峰值)所经历的时间称为各组分的保留时间tr.实践证明,在条件(包括载气流速、固定相的材料和性质、色谱柱的长度和温度等)一定时,不同组分的保留时间tr也是一定的.因此,反过来可以从保留时间推断出该组分是何种物质.故保留时间就可以作为色谱仪器实现定性分析的依据. 检测器对每个组分所给出的信号,在记录仪上表现为一个个的峰,称为色谱峰.色谱峰上的极大值是定性分析的依据,而色谱峰所包罗的面积则取决于对应组分的含量,故峰面积是定量分析的依据.一个混合物样品注入后,由记录仪记录得到的曲线,称为色谱图.分析色谱图就可以得到定性分析和定量分析结果. 图中c为气相色谱仪的结构.载气由载气钢瓶提供,经过载气流量调节阀稳流和转子流量计检测流量后到样品气化室.样品气化室有加热线圈,以使液体样品气化.如果待分析样品是气体,气化室便不必加热.气化室本身就是进样室,样品可以经它注射加入载气.载气从进样口带着注入的样品进入色谱柱,经分离后依次进入检测器而后放空.检测器给出的信号经放大后由记录仪记录下样品的色谱图.