询问绿色荧光蛋白EGFP-actin标记细胞骨架的具体操作?
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2025/01/22 15:54:25
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回答完,才发现这个问题你肯定提问过.
不知道为什么原来我辛辛苦苦的回答不见了?
要尊重别人的劳动成果.
如果瞬时表达:
将actin基因,放入pEGFP-N1或pEGFP-C1的多克隆酶切位点,注意避免移码突变.
将重组质粒用脂质体法(invitrogen公司的lipofectamine 2000试剂)导入细胞,或用磷酸钙法导入细胞即可.
如果稳定表达,建议用lentivirus vector ,也就是慢病毒载体导入细胞即可.
重组蛋白EGFP-actin在细胞内表达后,自然的混入细胞骨架中,将之标记绿色荧光.
可以直接买相关的产品直接转染。用lipo2000和慢病毒转染,用G418筛选或流式挑选,建立稳定株。
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