提取DNA 的时候怎么样可以尽量把其中的蛋白质除尽,

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/22 16:19:35
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可以在提取缓冲液中加入10%CTAB,CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)是一种去污剂,可溶解细胞膜,它能与核酸形成复合物,在高盐溶液中（（0.7 mol/L NaCl）是可溶的,当降低溶液盐浓度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）时,从溶液中沉淀,通过离心就可将CTAB-核酸的复合物与蛋白,多糖类物质分开.
在使用蛋白酶K的基础上还可以用20%的SDS,SDS是阴离子去污剂,作为变性剂和助溶试剂,它能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白分子的二、三级结构.而强还原剂如巯基乙醇,二硫苏糖醇能使半胱氨酸残基间的二硫键断裂.在样品和凝胶中加入还原剂和SDS后,分子被解聚成多肽链,解聚后的氨基酸侧链和SDS结合成蛋白- SDS胶束,所带的负电荷大大超过了蛋白原有的电荷量,这样就消除了不同分子间的电荷差异和结构差异.
然后就是氯仿/异戊醇抽提两次,两次的效果要明显好于一次的,当然要非常小心不要吸到中间层的白色

拿苯酚和氯仿重新重提一遍

加入蛋白质水解酶

酚/氯仿/异戊醇之后再加一步单独氯仿试试

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