为什么在PCR反应过程中,使用三个不同的温度变化
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/24 08:58:28
为什么在PCR反应过程中,使用三个不同的温度变化
为什么在PCR反应过程中,使用三个不同的温度变化
为什么在PCR反应过程中,使用三个不同的温度变化
第一个一般在94－95度左右,叫做变性,就是通过加热打开双链.
第二个温度点叫做退火,根据引物的TM算出,一般比TM低5度,有利于引物的结合.
第三个温度叫做延伸,一般采用72度.是引物结合后DNA聚合酶按照模板合成新的链.一分钟一千个碱基对.
如此循环.
现在很多PCR都采用2部法,由于采用了不同的DNA聚合酶（最佳温度60度）.这样退火和延伸采用一个温度.
你所说的三个温度变化即变性、退火和延伸过程。变性过程是DNA双链打开变为单链的过程，随后温度降低至退火温度，使特异性的引物与模板发生结合，最后进入延伸过程，Taq酶在此温度下利用单脱氧核苷酸沿着DNA链进行合成，并最终形成2个相同的PCR产物。其实目前有的试剂盒已经可以进行2个温度变化了，退火和延伸都是用60℃，在荧光定量PCR方面是用较多。...
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你所说的三个温度变化即变性、退火和延伸过程。变性过程是DNA双链打开变为单链的过程，随后温度降低至退火温度，使特异性的引物与模板发生结合，最后进入延伸过程，Taq酶在此温度下利用单脱氧核苷酸沿着DNA链进行合成，并最终形成2个相同的PCR产物。其实目前有的试剂盒已经可以进行2个温度变化了，退火和延伸都是用60℃，在荧光定量PCR方面是用较多。
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这叫三步法，也有两个温度的。
一般的都是变性，退火，延伸，当退火温度达到65度以上的时候即快接近延伸温度的时候采用两步法，看看pcr说明书就可以明白了。
要想明白原因的话，就不能不好好理解原理。首先是双链的分开，即变性。退火温度是引物与模板相结合的过程，一般不超过TM-5度，一般是50-55度，pcr的时候调节温度获取特异性好的条带就ok了。延伸就不用讲了...
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这叫三步法，也有两个温度的。
一般的都是变性，退火，延伸，当退火温度达到65度以上的时候即快接近延伸温度的时候采用两步法，看看pcr说明书就可以明白了。
要想明白原因的话，就不能不好好理解原理。首先是双链的分开，即变性。退火温度是引物与模板相结合的过程，一般不超过TM-5度，一般是50-55度，pcr的时候调节温度获取特异性好的条带就ok了。延伸就不用讲了
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1、变性：加热使模板DNA在高温下（94-95℃）变性，双
链间的氢键断裂而形成两条单链，即变性阶段。
2、退火：在体系温度降至37-65℃，模板DNA与引物按碱基
配对原则互补结合，使引物与模板链3’端结合，形成部分
双链DNA，即退火阶段。
3、延伸：体系反应温度升至中温72℃，耐热DNA聚合酶以单
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1、变性：加热使模板DNA在高温下（94-95℃）变性，双
链间的氢键断裂而形成两条单链，即变性阶段。
2、退火：在体系温度降至37-65℃，模板DNA与引物按碱基
配对原则互补结合，使引物与模板链3’端结合，形成部分
双链DNA，即退火阶段。
3、延伸：体系反应温度升至中温72℃，耐热DNA聚合酶以单
链DNA为模板，在引物的引导下，利用反应混合物中的4
种脱氧核苷三磷酸（dNTP），按5’到3’方向复制出互补
DNA，即引物的延伸阶段。
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