将目的基因导入受体细胞此步骤该如何检测?

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 15:17:01
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将目的基因导入受体细胞此步骤该如何检测?
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将目的基因导入受体细胞此步骤该如何检测?
该检测需要以下几个环节
1、检测重组载体是否导入受体细胞
2、重组载体内是否重组入外源基因
3、重组载体内的外源基因是否为目的基因
第一步 通常是使用载体自带的标记基因 （主要为抗性基因）完成 如常见的T-Vector 为氨苄抗性 使用适量的氨苄培养基进行筛选 生长出来即为导入重组载体 其他载体类似
第二步 通常也使用载体自带标记 如T-Vector的LacZ基因 可以使用IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）作为安慰诱导剂进行诱导 在含有X-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷）的培养基中筛选 白色斑点即为插入阳性第三步 通常使用两种或以上的不同原理的验证方法验证 如酶切验证和PCR验证加以测序验证进行确认 导入的片段是否为目的基因

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