你能不能再帮我解一体题,论述农杆菌介导的植物转基因过程的主要原理和方法
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/26 09:00:24
你能不能再帮我解一体题,论述农杆菌介导的植物转基因过程的主要原理和方法
你能不能再帮我解一体题,论述农杆菌介导的植物转基因过程的主要原理和方法
你能不能再帮我解一体题,论述农杆菌介导的植物转基因过程的主要原理和方法
原理：
农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌,它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这些细胞),并诱导产生冠瘿瘤或发状根.
根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒,其上有一段T-DNA,农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后,可将T-DNA插入到植物基因组中,并且可以通过减速分裂稳定的遗传给后代,这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础.
人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区,借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合,然后通过细胞和组织培养技术,再生出转基因植株.农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中,近年来,农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用.
农杆菌转化植物细胞涉及一系列复杂的反应,主要包括：①受伤的植物细胞为修复创伤部位,释放一些糖类、酚类等信号分子.②在信号分子的诱导下,农杆菌向受伤组织集中,并吸附在细胞表面.③转移DNA上的毒粒基因被激活并表达,同时形成转移DNA的中间体.④转移DNA进入植物细胞,并整合到植物细胞基因组中.
方法：（根据不同受体环境基因要求而不同）
1． 农杆菌准备
2． 外植体的准备（愈伤组织、悬浮细胞系、幼嫩茎段或叶片）;
3． 用 MS-AS液体培养基稀释原菌液15倍（1.5ml / 20ml）或离心后稀释3倍;
4． 外植体与菌液共培养20 分钟;
5． 放置在带滤纸的培养皿上（注意充分吸干多余的菌液）;
6． 将外植体接种到MS-AS固体诱导培养基,培养2－3天 ;
7． 移至含卡那霉素（Kan）300mg/L和羧苄青霉素（Cb 300mg/L）的固体筛选培养基上进行Kan抗性愈伤组织的筛选;
8． 隔20天,进行第二次筛选；
9． 抗性愈伤组织在固体筛选培养基上分化成苗；
10 在生根培养基上生根,获得完整的再分化植株.