多克隆抗体的制作步骤用疫苗制备抗体，剂量怎么算
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 13:11:13
多克隆抗体的制作步骤用疫苗制备抗体，剂量怎么算
多克隆抗体的制作步骤
用疫苗制备抗体，剂量怎么算
多克隆抗体的制作步骤用疫苗制备抗体，剂量怎么算
实验方案根据抗原的性质不同而异.下面以制备家兔抗人IgG免疫血清为例作具体说明.
1. 用剪刀剪去家兔两后脚掌的部分兔毛,以酒精及碘酒消毒皮肤；
2. 第一次免疫: 用2ml注射器吸取弗氏完全佐剂(FCA)乳化的抗原(人IgG)下称FCA-IgG)液1ml,每侧脚掌皮下各注入0.5ml.
3. 第二次免疫：间隔10-14天后,于两侧 窝及鼠蹊部肿大的淋巴结内注入FCA-IgG,每个淋巴结注0.1ml,其余注入淋巴结附近皮下共1ml.如淋巴结未肿大或肿大不明显时,直接注入两侧 窝及鼠蹊部皮下.
4. 间隔7-10天后,从耳静脉采血0.5～1.0ml,分离血清,以双相琼脂扩散试验测定免疫血清的抗体效价(即试血).效价至少应达到1∶16以上时才能放血.
5. 若效价未达到要求,可用不加佐剂的抗原液(人IgG)耳静脉内注射免疫.即于1周内注射3次,分别为0.1、0.3、0.5ml.间隔1周再试血.如效价达到要求应立即放血.另外,也可在第2次免疫后,以弗氏不完全佐剂(FIA)乳化的抗原(人IgG)(简称FIA-IgG)再免疫1-2次.注射部位、剂量和间隔均同第2次,再试血测抗体效价,如效价达到要求立即放血.
我们实验室现在通用的方案是:
第一次免疫：1ml弗氏完全佐剂(FCA)与100ug蛋白抗原／1mlPBS（一只兔子用量）充分研磨混匀,达到“油包水”的状态,分四点注射：双腋下、腹股沟.
第二次免疫：间隔4周,换用弗氏不完全佐剂,其余同第一次免疫
第三次免疫：同上
测定血清效价,间接ELISA,10ug／ml抗原包被,效价1:64000以上可以放血,也可以再加强免疫一次：生理盐水稀释抗原,耳缘静脉注射,一周内放血