T-DNA可随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变.用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥,待植株形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T－DNA上带有抗除草
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/26 12:55:02
T-DNA可随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变.用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥,待植株形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T－DNA上带有抗除草
T-DNA可随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变.
用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥,待植株形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T－DNA上带有抗除草剂基因)悬浮液中以实现转化.在适宜条件下培养,收获种子(称为T1代).
(1)为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾,需要去除________,因为后者产生的________会抑制侧芽的生长.
(2)为筛选出已转化的个体,需将T1代播种在含________的培养基上生长,成熟后自交,收获种子(称为T2代).
(3)为筛选出具有抗盐性状的突变体,需将T2代播种在含________的培养基上,获得所需个体.
(4)经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体.为确定抗盐性状是否由单基因突变引起,需将该突变体与________植株进行杂交,再自交________代后统计性状分离比.
(5)若上述T－DNA的插入造成了基因功能丧失,从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性________.
6）根据T-DNA的已知序列,利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段.提取 植株的DNA,用限制酶处理后,再用 将获得的DNA片段连接成环（如右图）以此为模板,从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取 作为引物进行扩增,得到的片断将用于获取该基因的全序列信息.
就想问一下滴（6）为什么选BC,如果从AD开始复制,那么复制玩T-DNA片段后会自动停止吗?
T-DNA可随机插入植物基因组内,导致被插入基因发生突变.用此方法诱导拟南芥产生突变体的过程如下：种植野生型拟南芥,待植株形成花蕾时,将地上部分浸入农杆菌(其中的T－DNA上带有抗除草
PCR扩增技术中,终产物一般是位于两端扩增引物中间的序列片段.如果用AD做引物,第一个问题是扩增效率问题,普通PCR酶一般仅支持2KB以下产物长度,再往上需要特殊的酶,但一般也就是10个kb,而AD间是T-DNA全长,一般比较长,普通PCR是扩增不成功的；其次是能否获得产物的问题,就算你能够把整个AD段扩增成功,扩增产物中会有非常多的AD间序列,极少量的既有AD又有部分BC的序列,二者之间的比例会是2的20次方倍以上,这与你的PCR循环次数设定有关.所以用AD扩增,BC间序列被进一步稀释,还不如不做PCR了.这里就要说一下PCR的原理了,从A引发的新DNA链的合成,在D不会终止,但因为从D引发合成的新链D1没有D后面的片段,以D1为模板,从A引发的新新链A2D1就不会含有D后面的片段,这样,第一次循环后,产物中有一半缺乏D后片段,第二次循环后,产物中有四分之三缺乏D后序列,第n次循环后,产物中有1减2的n次方的比例缺乏该片段,到时候你怎么检测如此低比例的东西呢?对于A后面的片段也是如此.所以,用AD富集的产物与BC正相反,所以用BC而非AD.