α—溴萘有什么作用?急用!在高等植物染色体Giemsa分带法中需要用α—溴萘处理3小时,请问这一步的目的是什么?其中α—溴萘又有什么作用呢?最好说明答案出处

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α—溴萘有什么作用?急用!
在高等植物染色体Giemsa分带法中需要用α—溴萘处理3小时,请问这一步的目的是什么?其中α—溴萘又有什么作用呢?
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α—溴萘有什么作用?急用!在高等植物染色体Giemsa分带法中需要用α—溴萘处理3小时,请问这一步的目的是什么?其中α—溴萘又有什么作用呢?最好说明答案出处
α—溴萘
1-Bromonaphthalene
C10H7Br
用于折光率的测定、染料及有机化合物的合成, 也用作干燥物的传热介质
在生物实验中用于阻断细胞分裂活动.作用类似于秋水仙素.
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2、预处理：目的,使获得中期分裂相较多的细胞,使染色体缩短,分散,便于压片观察.
预处理机理：阻止或破坏纺纺锤体微管的形成,使有丝分裂过程被抑制在分裂中期阶段,以便累积较多的处于分裂中期的分裂相；导致chr高度浓缩、变短,利于chr的分散.
方法1:冷冻处理
根尖放入盛蒸馏水的指形管中,置于冰水共存的冰瓶中,然后把冰瓶放到0—3℃的冰箱中处理24小时.染色体数较多的实验材料可适延长时间（20—40小时）,但需注意勿使材料结冰.
方法2:药剂处理
a.0.01-0.2%秋水仙素溶液处理2-4h
b.对二氯苯饱和水溶液处理3-4h
c.100ml对二氯苯饱和水溶液加1-2滴α-溴萘处理3-4h
d.0.002M8-羟基喹啉处理3-4h
药剂处理时温度不能过高,以10-15℃为宜.
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(六)植物细胞有丝分裂
一、实验目的
(1) 学习和掌握植物根尖细胞压片技术.
(2) 观察植物细胞有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化.
二、实验原理
有丝分裂是植物细胞增殖的主要方式,在有丝分裂过程中,细胞核内的染色体能准确地复制,并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去,使子细胞遗传组成与母细胞完全一样.从而可推断生物性状的遗传与染色体的准确复制和均等分配有关,支配生物性状的遗传物质主要存在于细胞核内的染色体上.
高等植物有丝分裂主要发生在根尖、茎生长点及幼叶等部位的分生组织,根尖取材容易,操作和鉴定方便.通过对根尖的固定、染色和压片,可在显微镜下观察到大量处于有丝分裂各个时期的细胞和染色体,看到染色体的变化特点和染色体的形态特征,进行染色体计数.为了获得更多的中期染色体图像,可以采用药物处理或冷冻处理的方法,阻止纺锤体的形成,使细胞分裂停止在中期,同时还可以使染色体缩短,易于分散,便于观察研究.另外,通过对细胞组织进行酸性水解或酸处理除去细胞之间的果胶层,并使细胞软化,便于细胞彼此分开,有利于压片和染色.
三、实验材料
小麦 ( Triticum Spp ． ) 、玉米 ( Zea mays ) 、大蒜 ( Aillumsativum ) 、洋葱 (Aillum cepa ) 、蚕豆 (Vicia faba ) 等.
四、实验器具和药品
1 ．器具 冰箱,恒温箱,显微镜,水浴锅、分析天平、扭力天平、电炉、温度计、剪刀、镊子、刀片、量筒、量杯、三角瓶、烧杯、漏斗、培养皿、酒精灯、滴瓶、载玻片、盖玻片、滤纸、标签、胶水等.
2 ．药品 无水酒精、 95 ％酒精、 70 ％酒精、 45 ％酒精、 0.5 ％醋酸洋红、 0.5 ％苏木精液、 4 ％铁明矾液、苯酚,亚硫酸、二甲苯、秋水仙素、对二氯苯、 8- 羟基喹啉、α－溴萘、 lmol/L 盐酸、 25 ％纤维素酶和 2.5 ％果胶酶混合液、加拿大树胶等.
五、实验步骤
1 ．培养
(1) 大蒜和洋葱根尖：将大蒜或洋葱置于盛清水的小烧杯口上,使根茎部与水接触,然后转移到 25 -28 ℃ 的条件下培养．待根尖长到 2cm 左右时,在上午 9 － 10 时剪去根尖约 lcm 备用.
(2) 玉米或小麦,蚕豆根尖：用温水将蚕豆种子浸种 2 天,玉米及小麦种子浸种 1 天,侍吸水膨胀后转移到铺有几层吸水纸的培养皿或塘磁盘中,上面盖双层湿纱布并加入少许水,放在 25 -28 ℃ 条件下培养．待根尖长到 2cm 左右时．在上午 9 一 l0 时或下午 3-5 时取下根尖备用.
2 ．预处理 为了有利于对有丝分裂中染色体的观察和计数,在固定之前应对剪下的根尖进行预处理,这样可以改变细胞质的粘度,抑制和破坏纺锤丝的形成．促使染色体缩短和分散.预处理的方法有低温预处理和药物预处理.
(1) 低温预处理：将剪取的根尖浸入盛有蒸馏水的烧杯内,置于 4 ℃ 的冰箱中进行低温处理 24 小时.此法效果很好.对染色体无破坏作用,染色体缩短均匀．简便易行,各种作物都适用.
(2 ) 药物预处理：常用药物有秋水仙素溶液、对二氯苯溶液、 8 —羟基喹啉等.
3 ．固定 借助于物理方法或化学药物的作用,迅速渗入组织和细胞将之杀死,使其形态结构和内含物尽可能保持生活时的完整和真实状态.固定时,将预处理过的根尖用蒸馏水冲洗两次 ( 约 5 分钟 ) .然后移入卡诺氏固定液中,在 4 — 15 ℃ 条件下固定 20 一 24 小时后用 70 ％酒精冲洗 2 次转入 70 ％酒精中．在 4 ℃ 冰箱内保存,保存时间最好不超过二个月．经过较长时间保存的材料,进行观察前可以换用固定液再处理一次效果较好.或将预处理过的根尖放入 0.075mol/L KCI 溶液中低渗 20 分钟．然后在蒸馏水中冲洗 2 — 3 次 ( 约 10 分钟 ) 待用.
4 ．解离 使分生组织细胞间的果胶质分解．细胞壁软化或部分分解．使细胞和染色体容易分散压平.解离有酸解和酶解两种方法：
(1) 酸将根尖从固定液中取出,用蒸馏水漂洗．然后放入已经在 60 ℃ 水浴锅中预热的 1 mol/L HCI 中,在 60 ℃ 恒温条件下解离 10 — 15 分钟,当根尖透明呈米黄色时取出,用蒸馏水冲洗 2 — 3 次.
(2) 酶将根尖从固定液中取出,放在 0.1mol ／ L 醋酸钠中漂洗,用刀片切除根冠以及延长区 ( 根尖较粗的蚕豆,可以把分生组织切成 2-3 片 ) ,把根尖分生组织放到醋酸钠配制的 2.5 ％的纤维素酶和果胶酶的等量混合液中．在 25 — 28 ℃ 条件下处理 4 — 5 小时.此时组织已被酶液浸透而呈淡褐色,质地柔软而仍可用镊子夹起,用滴管将酶液吸掉．再滴上 0.1 mol ／ L 醋酸钠,使组织中的酶液渐渐渗出,再放入 45 ％醋酸.
5 ．后低渗 将解离后的根尖放在蒸馏水中冲洗 2 — 3 次 ( 约 10 分钟 ) .酶解后的根尖放入蒸馏水中浸泡 10 － 15 分钟,然后再冲洗 2 — 3 次.一定要冲洗干净,否则影响染色.低渗后的根尖放入 70% 酒精后备用.
6 ．染色与压片
(1) 醋酸洋红染色制片：取一处理好的根尖置于载玻片中间,用吸水纸吸去多余的保存液,用刀片将根尖分生组织切 1 ：.将其切成薄片,加一小滴醋酸洋红染色液．约 5 分钟后加盖玻片.用吸水纸放在盖玻片上面,左手按住载玻片,用右手拇指在吸水纸上对准根尖部位施加压力.或用铅笔的橡皮头轻敲盖玻片即可,使材料均匀分散,细胞分离压平.压力要适当,注意不要移动盖片.为增强染色效果,可将载玻片在酒精灯上稍加热,但不使其沸腾.以免染料沉淀.加热的作用不仅可以使材料软化和易于着色．而且可以破坏部分细胞质,使核和染色体有一个比较清爽的背景.如果整个细胞染色较浅,可沿盖片一侧,滴加少许染色液,使其慢慢渗入．放置片刻再进行加热,如此反复进行染色.
醋酸洋红常用于染色体的临时制片,其着色不强,分色效果也不甚佳,故不宜制作永久制片,
(2) 醋酸地衣红染色制片：由于地衣红很容易溶于酒精.所以材料从保存液中取出后,应当充分洗净后浸入 45 ％醋酸中再进行染色.染色时,将材料置于小试管中,加入含盐酸的 2 ％地衣红使材料浸没,在酒精灯上加热 2 － 3 秒钟．静置约半小时或更长时间,取出材料置载玻片上,加一滴不含盐酸的 l ％醋酸地衣红染色液.如醋酸洋红法操作进行压片.地衣红染色液染色,着色力比洋红强,染色较深,尤其对根尖等体细胞染色体的染色比洋红更显优越.
(3) 铁矾—苏木精染色制片法：这是用在根尖细胞有丝分裂染色体计数中效果最好的一种方法,对各种植物的染色体均可染上较深的颜色,分色清晰,照像效果较好．利于标本长期保存.
将解离冲洗后的材料置于 4 ％的铁矾水溶液中染色 2 — 4 小时,如加温 (30 一 40 ℃ ) 媒染,则可缩短至 0.5 － 1 小时.换水洗涤 4 － 5 次．每次约 5 分钟,务必将残留的铁矾充分洗净.再置于 5 ％苏木精水溶液中染色 2 － 4 时.如在染色时发现染色液混浊,则表示铁矾未洗净,需重新放入水中洗涤后再行苏木精染色.染色后的材料用水冲洗 5 — 10 分钟左右,移入 45 ％的醋酸内进行分色和软化 10 一 20 分钟,方可压片.压片时,用镊子取根尖置于载玻片上,切下根尖分生组织.将其切成薄片,滴一小滴 45 ％的醋酸,迅速捣碎根尖,加盖玻片压片,具体方法同醋酸洋红法.
铁矾—苏水精染色时,媒染要充分,媒染后水洗要彻底；在此基础上,苏木精染色也要充分,醋酸分色软化要适宜,位染色体成深兰色,而细胞质退淡.
7 ．境检 压好的片子先在低倍镜下观察,可观察到有丝分裂过程中不同分裂时期的染色体.选取不同分裂时期的典型细胞,换高倍镜观察,注意细胞核及染色体,纺缍体等的变化动态.
8 ．制备永久片
六、实验作业
(1) 制作 1 一 2 张合格的有丝分裂玻片,交 1 — 2 张注明分裂时期及染色方法的永久制片.
{2} 绘制 2 － 4 张有丝分裂时期的简图.