我现在想要将引物加水稀释,OD：2.0,nmol/OD=5.17,MW=5784.83,请问我该如何加水稀释?我现在想要将引物加水稀释,OD：2.0,nmol/OD=5.17,MW=5784.83,请问我该如何加水稀释,为什么?（一定要说明原因啊）
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/19 18:06:35
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我现在想要将引物加水稀释,OD：2.0,nmol/OD=5.17,MW=5784.83,请问我该如何加水稀释?
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以下使用方法希望对你有用：
1. OligoDNA是以OD260为单位来计量的,是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中,260nm波长下吸光度为1A260nm 的Oligo溶液定义为1OD260单位.根据此定义,1OD260单位相当于33µg的OligoDNA,您可根据此数据和您的OligoDNA分子量计算得到摩尔数,以此计算不同摩尔浓度的溶液.2. 引物合成公司提供的序列报告中分子量计算公式如下：MW=(A碱基数×312)+(C碱基数×288)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61.例如 ：TGGGCGGCGGTGGTGTTACGT MW=（1×312）+（3×288）+（11×328）+（6×303）-61=65413. OligoDNA的分子量还可以用以下近似方法计算：OligoDNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5,则一条OligoDNA的分子量=碱基数×324.5.例如,您得到一管标为1OD260nm的20 个碱基OligoDNA分子量=20×324.5=6490质量数=1×33=33µg摩尔数=33/6490=0.0051µmol4. 引物在出厂时都标有1OD 相当于多少µmol 的计算结果,进行稀释时的引物加水量可以按以下公式计算： 稀释成100pmol/µl时：1OD引物的加水量（µl）=1OD相当于µmol 数×10000例如：您拿到的引物DNA合成报告单上标有1OD≈0.0035µmol,包装量是1OD/管,如果您希望将引物浓度定为100pmol/µl（µmol/L）,那么只需用35µl无核酸酶的双蒸水将1OD的引物干粉溶解即可.5. 由于OligoDNA呈很轻的干膜状附在管壁上,打开时极易散失,所以打开管子前请先离心,然后再慢慢打开管盖,溶解时请加足量水后盖上管盖,充分上下振荡5-10分钟.6. 需对OligoDNA作电泳分析,必须采用含7M尿素的聚丙烯酰胺凝胶电泳和1倍TBE Buffer,琼脂糖电泳不适于OligoDNA电泳,另外为防止加样时的扩散和二级结构影响,样品上样前必须加饱和尿素处理再上样.7. OligoDNA的5’端和3’端均为羟基,若需磷酸基团的则要另外再处理或直接在合成时于5’和3’端标上磷酸.8. 由于溴化乙锭对单链寡聚DNA的染色效果与DNA的结构和长度关系密切,相等OD值的不同OligoDNA样品染色后深浅可大不相同,若电泳后EB染色不出现条带或出现的条带很浅,您可将电泳凝胶于荧光板上再在紫外灯下观察,往往会看到明亮的绿色荧光背景下清晰的黑色条带；若无此条件,也可用紫外分光光计度对OD值进行检测.9. 干粉状态的OligoDNA可长期贮存.溶解后建议分装成若干管,-20℃保存,用一管取一管.溶解后的引物4℃保存不超一周为宜.