想构建一个诱导稳定表达的细胞株,求助实验方案想做一个P19细胞的诱导稳定表达的细胞株,想用pRevTRE/pRevTet-on系统可以吗?但我是研一新生,对质粒构建不是很了解,想请问一下构建过程中有什

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/16 17:58:32

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想构建一个诱导稳定表达的细胞株,求助实验方案
想做一个P19细胞的诱导稳定表达的细胞株,想用pRevTRE/pRevTet-on系统可以吗?但我是研一新生,对质粒构建不是很了解,想请问一下构建过程中有什么细节要考虑到?比如筛选标记,启动子,密码子偏好,终止子/加尾信号,CDS,是否需要报告基因等,但具体操作起来没有以前师兄师姐的指导感觉很难,请各位高手有实验操作步骤的不吝赐教!

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用质粒好像不是很稳定,最好能整合到基因组上,可以用类似温和性病毒的载体,报告基因应该有,最好使用绿色荧光蛋白或者红色荧光蛋白,因为是诱导,所以需要可诱导的启动子,如果你表达的蛋白需要纯化,最好是加一个尾巴,用于纯化,否则应该不需要,筛选标记可有可无的,因为有红色荧光蛋白就可以用极限稀释法来构建单克隆细胞株了.
一点浅见仅供参考

想构建一个诱导稳定表达的细胞株,求助实验方案想做一个P19细胞的诱导稳定表达的细胞株,想用pRevTRE/pRevTet-on系统可以吗?但我是研一新生,对质粒构建不是很了解,想请问一下构建过程中有什如何构建稳定细胞株? 哪里可以帮忙用CRISPR/Cas9构建稳定敲除的细胞株吗? 能稳定表达GFP细胞株有哪些? 引物基因构建克隆载体与表达载体重组子的筛选诱导表达以及如何检测和纯化表达产物假定你要克隆和表达神经生长因子(EGF),用于研究该因子对神经细胞的保护作用.请设计一个实验方案, 通常一个细胞株里有多少细胞,细胞株里的细胞可以分开进行多组实验吗? 不用IPTG诱导的重组蛋白能在BL21中表达吗,如果表达经SDS-PAGE电泳后能看到条带吗,.我最近在做重组蛋白的表达,我构建好了一个重组载体,启动子是不用IPTG诱导表达的,我跑了两次电泳结果都没哪里的CRISPR/Cas9敲入基因构建稳转的细胞株服务做的最好? 如何利用慢病毒载体构建稳定表达外源基因的细胞系不是表达荧光蛋白的那种基因表达载体的构建我要扩增几个CDS序列,构建载体后用来诱导蛋白表达,但是在设计引物的时候很受限制.我想问一下可否在起始在进行siRNA实验时为何多采用构建siRNA表达质粒的方法有没有机构可以代做实验,设计EGFP融合表达载体构建的相关序列? 哪家公司可以代做实验,设计EGFP融合表达载体构建的相关序列? CRISPR/Cas9做定点的原理是什么啊?哪里可以帮忙用CRISPR/Cas9构建稳转的细胞株吗? 如何构建一个能高效表达目的基因的表达型载体 IPTG诱导表达的作用原理是什么? 诱导大肠杆菌表达时IPTG的量