RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/26 05:10:18

RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性RT-PC

RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性
RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢
TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性的,再测序正确,然后转染细胞,这样不是省事了么?为什么还要进行TA克隆呢?有点百思不带其解,

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确实可以不一定要TA克隆.
你可以在设计引物的时候在引物的5'端加上酶切位点,比如你选中XXXYYY位点你可以把引物设计为AA－XXXYYY－AGCT(AGCT 代表你原来的引物序列）.我一般在头上加2个A,这样酶切效果好一些.两个引物可以加相同,也可以不同酶切位点.取决于2点：
1.扩增区没有该位点,（必须知道你扩增区的序列）
2.对应于你的目标分子.
TA克隆的好处在于选择灵活,万一一个位点不好使,同一批质粒还可以用其他酶再切.随时可以扩增.还有方便下游作业,比如说你要连接两端PCR产物,先克隆会比较方便一些.
所以2种方法各有优缺点,你可以根据情况选用.

TA克隆效率比较高，而且如果目的基因序列不明，那么就无法恰当的选择内切酶，所以一般TA克隆后测序，然后再用酶切。

RT-PCR出一段目的基因,为什么要把它先TA克隆呢?为什么不能直接把它连接到相应的质粒上呢TA克隆的意义是什么呢?能否讲通俗点呢?如果不进行TA克隆,直接酶切连接到相应的载体上,再筛选阳性性染色体只存在于生殖细胞队吗?还有为什么pcR技术扩增目的基因前要已知一段目的基因的核苷酸序列呢性染色体只存在于生殖细胞队吗?还有为什么pcR技术扩增目的基因前要已知一段目的基因的核苷酸序列呢 PCR技术获取目的基因时为什么要至少经过3次循环才能从DNA分子中分离出目的基因 pcr没把目的基因扩增是什么原因已知一基因两侧序列,如何将该基因克隆你没明白我的意思，是要从如何获得目的基因上来回答；比如，知道一段蛋白质的mRNA序列，就用RT-PCR制备出cDNA，从而克隆。现在是知道两侧序列…… PCR技术如何获取目的基因呢,另外PCR的过程为什么会扩增出不同长度的链 PCR技术为什么是获取目的基因的途径PCR扩增需要模板,为什么它还是获取目的基因的途径从克隆载体上PCR出目的基因原理 PCR引物是目的基因中的一段么,还是和目的基因中的某段是互补的? 做RT-PCR时,上下引物退火温度一定要一样吗?内参条带很亮,为什么没有目的基因? pcr为什么要扩增,PCR的目的是获得目的基因片段?但为什么要扩增很多次呢,小菜题不懂.为什么要大量呢 PCR怎么获得目的基因为什么“利用PCR技术扩增目的基因”是获取目的基因的步骤?（为什么检测一些基因往往要用RT-PCR?直接扩增其DNA不行吗? RT-PCR数据分析菜鸟请教大虾：已知目的基因、GAPDH、目的基因/GAPDH比值怎么分析数据呢? PCR技术扩增目的基因的过程需不需要ATP?为什么?pcr PCR技术检测目的基因PCR不是用来获取目的基因吗?为什么书上说可以检测转基因生物是否含有目的基因?原理是什么?