如何确保pcr产物以正确的方向克隆到表达载体中 (未翻译方向)
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 16:13:27
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完全确保的话,第一,做酶切的两个酶要不一样；二你在做完酶切后,用磷酸化酶处理下,纯化后再连接（这一不会降低连接效率,但会确保质粒不自连.按正确方向克隆
设计PCR引物时在上下游引物5'端加上不一样的酶切，PCR后通过双酶切将PCR产物克隆到表达载体上。
酶切后PCR产物只能顺着一个方向连接，粘性末端互补的才会连到一起…
连接前：两端的酶切位点的选择，可以锁定于载体中你需要的那一段；
连接后检测：连接上之后，可以摇菌提质粒，根据你插入的那段序列前后的其他酶切位点，选择一对或几对酶，然后电泳检测，如果插入的方向不一样，切割下的片段的长度是不一样的...
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连接前：两端的酶切位点的选择，可以锁定于载体中你需要的那一段；
连接后检测：连接上之后，可以摇菌提质粒，根据你插入的那段序列前后的其他酶切位点，选择一对或几对酶，然后电泳检测，如果插入的方向不一样，切割下的片段的长度是不一样的
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TA克隆时,如何选择T载体?在三博克隆测序,PCR产物长度只有85bp,选择什么样的T载体比较好呢?
简述用T-克隆载体进行PCR产物克隆的原理
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在测序前如何进行pcr产物的酶切纯化,注意我想知道的是用于测序的pcr产物酶切纯化,不是用于克隆的酶切.
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请问,把PCR产物拿去生物公司测序的问题是不是也是先要将PCR产物DNA连到载体上,再用载体的通用引物测序?应该不是吧……这个应该属于克隆测序吧?PCR产物直接测序是否就是直接用你给他的引
转基因为什么不能直接用PCR产物连接在表达载体上?我在做小麦转基因到拟南芥中,今天在想为什么不能把目标基因PCR后直接表达载体构建,而要用克隆载体后再构建表达载体?
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如何对PCR扩增的产物进行酶切?
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DNA分子克隆与PCR扩增DNA的区别T载体是克隆载体,能把目的基因片段转染到大肠杆菌扩增,但不表达.我新手弱弱的问一句为什么不直接把目的片段拿去跑PCR就行了,干嘛要用克隆载体去获得大量
PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体+目的片段,那么转化挑克隆提取的质粒片段是多大?PCR产物TA克隆,PGEM-T 载体的序列是大约3000bp,PCR产物的目的片段是450bp,那么：经过连接、转化后挑单克隆,提取质粒,提
人教版的,确保正确
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