DNA序列分析!GTTATATCATGTCCCCTTGTAACCATCTAGTTGCGTCTCGACATTCGCGCACCCTGTGCGAGTATCAGTGGACGCCTTCAAACTTAAAATCTGAAATACAACTTGGGTAAAACTTGGGTTTTACAAAAGATTTGGAAAACCCGACACCTGGGTCGGTGCTTGCGAACTAAATGAATTTCCAAAACCGCGGACCAGGGAACGTACCGGGTGTACGGTTTCCCGCTCTCGCACTTA

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/25 12:50:25
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DNA序列分析!
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以上为一段DNA序列,其上游下游序列未知,
1 请分析以上序列含有哪些单酶切位点的限制性内切酶
2 设计反向PCR扩增其上游下游序列未知序列的详细实验方案(包括选用什么酶酶切,设计具体引物)

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1 常见单一限制性酶切位点:
Hind III 495;Nde I 453;
2.1〉提取基因组DNA;
2.2〉用实验室常用的而序列上没有酶切位点的几种酶分别酶切基因组DNA,如EcoR I/BamH I/Sac I/Xho I完全酶解,得到四组片断;
2.3〉回收纯化这几组片断
2.4〉让片断自连,得到四个自连的文库;
2.5〉用片断上特有的酶Nde I(Nde I或Hind III,感觉Nde I对引物选择余地稍大 )分别去切文库,使DNA线形化;
2.6〉纯化线形DNA;
2.7〉以纯化线形DNA为模板,分别用梅切位点两端的引物(1F:5' TTGAAGGCGTCCACTGATACTC 3';1R:5' TGGAGGTCTCCCGACGTGGCT 3',可以多选几对,用巢氏引物效果更好)去扩增
2.8〉回收特意条带,测序.

1 用DNAstar 的mapdraw或者seqbuilder
2 用race,或者tail-pcr,具体自己看
没人给你那么详细的解释,百度知道是提高用的