用大肠杆菌表达蛋白时,要确定是上清还是包涵体表达,为什么沉淀里的包涵体不需要用尿素溶解就可以跑电泳我不明白这段话中的一些意思：“先破碎细胞,离心,沉淀和上清分别跑电泳,看看
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/25 08:54:27
用大肠杆菌表达蛋白时,要确定是上清还是包涵体表达,为什么沉淀里的包涵体不需要用尿素溶解就可以跑电泳我不明白这段话中的一些意思：“先破碎细胞,离心,沉淀和上清分别跑电泳,看看
用大肠杆菌表达蛋白时,要确定是上清还是包涵体表达,为什么沉淀里的包涵体不需要用尿素溶解就可以跑电泳
我不明白这段话中的一些意思：
“先破碎细胞,离心,沉淀和上清分别跑电泳,看看目的蛋白在包涵体中还是在裂解上清中.若在包涵体中,先洗涤包涵体,然后再用8M尿素或者6M盐酸胍溶解包涵体.”
主要想问,为什么用沉淀跑电泳可以确定目的蛋白是否在包涵体中呢?包涵体不是要溶解的吗,不溶解的话质量应该很大吧（因为包涵体里有很多蛋白）,质量大的话怎么可以用电泳来确定呢?电泳的原理就是根据蛋白质量大小来将不同的蛋白分开的呀?
首先，我知道什么是包涵体。第二，我没有说质量大不可以跑电泳。第三，我知道不同种电泳的原理各不相同。我对生物技术算不上十分精通，但这点常识还是有的。
我只想问，第三点中说“上样之前，需要用上样缓冲液处理样品，处理后，包涵体也就解聚了”，为什么上样缓冲液可以让包涵体解聚？
用大肠杆菌表达蛋白时,要确定是上清还是包涵体表达,为什么沉淀里的包涵体不需要用尿素溶解就可以跑电泳我不明白这段话中的一些意思：“先破碎细胞,离心,沉淀和上清分别跑电泳,看看
1）你应该是没有明白什么是包涵体,简单的说就是翻译的蛋白没有正确折叠而聚集在一起形成的,主要的是疏水作用.实际上就是很多个蛋白分子,这些蛋白并不是交联在一起的,用高浓度的尿素和盐酸胍可以使他们变性,解聚.
2）用沉淀跑电泳可以确定目的蛋白是否在包涵体?
包涵体是不溶于水的,比较总蛋白.沉淀,及上清中的诱导带就可以知道上清中有没有你想要的可溶蛋白了
3）电泳检测的话,可以用SDS-PAGE检测,在上样之前,需要用上样缓冲液处理样品,处理后,包涵体也就解聚了,每个蛋白分子与SDS结合,形成了可溶物.
4）质量大的话怎么可以用电泳来确定呢?
为什么不可以呢?DNA电泳,蛋白电泳不都可以吗?
5）电泳的原理就是根据蛋白质量大小来将不同的蛋白分开的呀?
不通种电泳的原理个不相同.SDS-PAGE可以简单的认为是根据蛋白质量来区分蛋白的.
你想不明白应该是不知道什么是包涵体,或者什么是电泳,电泳的原理,你自己还是在网上好好看看这些内容,应该不难理解.
上样缓冲液中有巯基乙醇,SDS,样品还要加热,破坏了包涵体之间蛋白的相互作用力,最好还是看看是怎么行成的包涵体吧
这学习一下