ELISA为什么所有孔都完全没颜色ELISA自己包被抗体—封闭—加样—二抗—HRP—TMB显色,上述步骤应该是对的,为什么所有孔都完全没颜色,做了6次了,怎么知道是哪一步出问题了,求大神解答!
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/25 18:16:52
ELISA为什么所有孔都完全没颜色ELISA自己包被抗体—封闭—加样—二抗—HRP—TMB显色,上述步骤应该是对的,为什么所有孔都完全没颜色,做了6次了,怎么知道是哪一步出问题了,求大神解答!
ELISA为什么所有孔都完全没颜色
ELISA自己包被抗体—封闭—加样—二抗—HRP—TMB显色,上述步骤应该是对的,为什么所有孔都完全没颜色,做了6次了,怎么知道是哪一步出问题了,求大神解答!
ELISA为什么所有孔都完全没颜色ELISA自己包被抗体—封闭—加样—二抗—HRP—TMB显色,上述步骤应该是对的,为什么所有孔都完全没颜色,做了6次了,怎么知道是哪一步出问题了,求大神解答!
全是阴性?
你的试验想检测什么?检测抗原?检测抗体?
你这个实验思路问题很大.
你自己先固定抗体,加样,是不是加抗原?再加二抗,请问,加不加这个样,也就是加不加这个抗原,影响实验结果吗?酶标二抗是和抗体结合的.还有你的二抗和一抗之间中间隔了个抗原,二抗还能和抗体结合吗?
如果你确定是步骤没有问题的话，不显色的因素很多，要一一排除。假如是二抗或者显色液的问题，可以用二抗和显色液混合看是否显色，每个因素逐一排除。我们的ELISA检测抗原或者抗体的步骤是这样的，你可以做个参考：包被好抗体的板条，加入待测样品，孵育后洗涤拍干，加入酶标抗原孵育后洗涤拍干，加入显色液显色。我是按你说的步骤做的，就是没有直接酶标二抗，是先加二抗在加亲和素HRP，这个HRP可以和显色液反应有颜色...
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如果你确定是步骤没有问题的话，不显色的因素很多，要一一排除。假如是二抗或者显色液的问题，可以用二抗和显色液混合看是否显色，每个因素逐一排除。我们的ELISA检测抗原或者抗体的步骤是这样的，你可以做个参考：包被好抗体的板条，加入待测样品，孵育后洗涤拍干，加入酶标抗原孵育后洗涤拍干，加入显色液显色。
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