如何理解革兰氏染色的机制?

如何理解革兰氏染色的机制?
如何理解革兰氏染色的机制?

如何理解革兰氏染色的机制?
革兰氏染色机制：
目前一般认为,革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分基础上的一种物理原因.通过初染和媒染操作后,在细菌细胞的膜或原生质体上染上了不溶于水的结晶紫与碘的大分子复合物.革兰氏阳性细菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量较高且分子交联度紧密,在乙醇洗脱时,肽聚糖网孔会因脱水而明显收缩,在加上它基本不含类脂,故乙醇处理不能在壁上溶出缝隙,因此结晶紫与碘的复合物仍牢牢阻留在其细胞壁内使其呈现紫色.反之,革兰氏阴性细菌因其壁薄、肽聚糖含量低和交联度松散,故遇乙醇后肽聚糖网孔不易收缩,加上它的类脂含量高,所以当乙醇把只类溶解后,在细胞壁上就会出现较大的缝隙,这样,结晶紫与碘的复合物就极易被溶出细胞壁,因此,通过乙醇脱色后,细胞又呈无色,这时再经沙黄等红色染料复染时即呈现红色.
革兰氏染色原理：
第一步：结晶紫使菌体着上紫色
第二步：碘和结晶紫形成脂溶性大分子复合物,分子大,能被细胞壁阻留在细胞内.
第三步：酒精脱色,细胞壁成分和构造不同,出现不同的反应.
第四步：沙黄复染,增加脱色菌与背景的反差并区别于未脱色菌.
G＋菌：细胞壁厚,肽聚糖网状分子形成一种透性障,当乙醇脱色时,肽聚糖脱水而孔障缩小,故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上.呈紫色.
Gˉ菌：肽聚糖层薄,交联松散,乙醇脱色不能使其结构收缩,其脂含量高,乙醇将脂溶解,缝隙加大,结晶紫-碘复合物溶出细胞壁,沙黄复染后呈红色.
革兰氏染色的方法：
1）涂片固定.
2）草酸铵结晶紫染1分钟.
3）自来水冲洗.
4）加碘液覆盖涂面染1分钟.
5）水洗,用吸水纸吸去水分.
6）加95%酒精数滴,并轻轻摇动进行脱色,30秒后水洗,吸去水分.
7）蕃红梁色液（稀）染10秒钟后,自来水冲洗.干燥,镜检.
革兰氏染色的意义：
1.鉴别细菌
2.选择药物
3.与致病性有关：革兰氏阳性菌能产生外毒素,革兰氏阴性菌能产生内毒素,两者的致病作用不同.

革兰氏阴性菌细胞壁中脂类物质含量高，肽聚糖含量低，染色过程中乙醇的处理，溶解了脂类物质，结果使得革兰氏阴性菌细胞通透性增加，染色所用的碘－结晶紫复合物也不会留在细胞内部，而是被乙醇抽提出来，所以革兰氏阴性菌不会被染色，在复染后会呈现复染液的红色。
革兰氏阳性菌细胞壁主要成分是肽聚糖，脂含量很低，在乙醇处理后细胞壁中肽聚糖被脱水，孔径减小，通透性降低，染色所用的碘－结晶紫复合物则被困在细胞内...

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革兰氏阴性菌细胞壁中脂类物质含量高，肽聚糖含量低，染色过程中乙醇的处理，溶解了脂类物质，结果使得革兰氏阴性菌细胞通透性增加，染色所用的碘－结晶紫复合物也不会留在细胞内部，而是被乙醇抽提出来，所以革兰氏阴性菌不会被染色，在复染后会呈现复染液的红色。
革兰氏阳性菌细胞壁主要成分是肽聚糖，脂含量很低，在乙醇处理后细胞壁中肽聚糖被脱水，孔径减小，通透性降低，染色所用的碘－结晶紫复合物则被困在细胞内部，所以导致细胞呈现紫色。

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革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。
细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，...

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革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。
细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G—）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数和球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在化学组成和生理性质上有很多差别，染色反应不一样。现在一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度底，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。 另外，阳性菌菌体等电点较阴性菌为低，在相同PH条件下进行染色，阳性菌吸附碱性染料很多，因此不易脱去，阴性菌则相反。所以染色时的条件要严格控制。例如，在强碱的条件下进行染色，两类菌吸附碱性染料都多，都可呈正反应；PH很低时，则可都呈负反应。此外，两类菌的细胞壁等对结晶紫—碘复合物的通透性也不一致，阳性菌透性小，故不易被脱色，阴性菌透性大，易脱色。所以脱色时间，脱色方法也应严格控制。
革兰氏染色原理：
G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈紫色。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。
革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：
1）涂片固定。
2）草酸铵结晶紫染1分钟。
3）自来水冲洗。
4）加碘液覆盖涂面染1分钟。
5）水洗，用吸水纸吸去水分。
6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。
7）蕃红染色液（稀）（或沙黄）染10秒钟后，自来水冲洗。干燥，镜检。
染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

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革兰氏染色主要是染的细菌的细胞壁。