实验"霉菌的形态观察"应注意哪些

实验"霉菌的形态观察"应注意哪些
实验"霉菌的形态观察"应注意哪些

实验"霉菌的形态观察"应注意哪些
霉菌的形态观察实验

霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到
3-
10μm
）,通常是细菌菌体宽
度的几倍至几十倍,因而可用低倍、高倍镜观察.霉菌菌丝细胞容易收缩变形,
孢子容易飞扬,
在制备霉菌标本时,
常用乳酸石炭酸溶液作为介质,
具有不使细
胞变形,可杀菌防腐,不易干燥,能保持较长时间等优点.

一、实验目的

1.
学习并掌握观察霉菌形态的基本方法；

2.
了解常见霉菌（根霉、毛霉、曲霉、
青霉
、红曲霉、白地霉）的基本形态特
征.

二、实验材料

1.
菌种：根霉（
Rhizopus sp.
）、毛霉（
Mucor sp.
）、
曲霉
（
Aspergillus sp.
）、
青霉
（
Penicillium sp.
）
、
红曲霉
（
Monascus sp.
）
的平板培养物,
白地霉
（
Geotrichum
candidum
）摇瓶培养液.

2.
培养基：土豆琼脂培养基（
PDA
）或察氏培养基.

3.
溶液或试剂：乳酸石炭酸棉蓝染色液.

4.
其他：无菌吸管,平皿,载玻片,盖玻片,解剖针,显微镜等.

三、实验原理

霉菌菌丝比较粗大（菌丝和孢子的直径达到
3-
10μm
）,通常是细菌菌体宽
度的几倍至几十倍,因而可用低倍、高倍镜观察.霉菌菌丝细胞容易收缩变形,
孢子容易飞扬,
在制备霉菌标本时,
常用乳酸石炭酸溶液作为介质,
具有不使细
胞变形,可杀菌防腐,不易干燥,能保持较长时间等优点.若加入棉蓝,又具有
一定的染色效果.

霉菌的有些结构在制片过程中易被破坏,
影响观察,
可采用载片培养法.
此
法便于直接在显微镜下观察,
尤其适用于根霉的假根、
曲霉的足细胞及分生孢子
链等结构的着生和生长情况的观察.
并且还可以在同一标本上观察到微生物发育
的不同阶段的形态.

四、操作步骤

（一）一般观察法：

1.
点种培养：
用接种针沾取斜面少许孢子在无菌的察氏培养基中央穿刺接种
（倒
置培养皿穿刺接种）,
30
℃下培养
7-10
天,形成巨大菌落培养物.

2.
直接制片：在载玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液于洁净,打开霉菌平
板培养物,
用解剖针从菌落的边缘挑取少量带有孢子的菌丝,
放入载玻片的染液
中,细心地把菌丝挑散开,加盖玻片,注意不要产生气泡,置于显微镜下观察,
菌丝呈兰色,颜色的深度随菌龄的增加而减弱.

观察根霉时,注意观察其菌丝有无横隔、假根、孢子囊柄、孢子囊、囊轴、
囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子.

观察毛霉时,注意观察其菌丝无横隔、孢子囊柄、囊轴、孢子囊孢子及后垣
孢子.

观察
曲霉
时,
注意观察其菌丝有横隔、
足细胞、
分生孢子梗、
顶囊、
小梗
（形
状、层数及着生情况）、分生孢子.

观察
青霉
时,注意观察其菌丝有横隔、分生孢子梗、帚状枝（小梗的轮数及
对称性）、分生孢子.

观察红曲霉时,注意观察其菌丝有横隔、分生孢子着生情况、闭囊壳、子囊
孢子.

（二）载玻片湿室培养观察法

也称载片培养法,
用无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上,
接种后盖上
盖玻片培养,
霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长.
培
养一定时间后,
将载玻片上的培养物置于显微镜下观察.
载片培养法制备的标本
片可直接在显微镜下观察,
这种培养观察方法保持了霉菌的自然生长状态,
尤其
适用于根霉的假根、
匍匐菌丝,
曲霉的足细胞的观察,
并且还可在同一标本片上
观察霉菌的不同生长阶段的形态.

载玻片湿室培养观察法具体操作：

1.
准备湿室：在培养皿底部铺一张圆形滤纸片,滤纸片上依次放上“
U
”形载
玻片搁架、
载玻片、
盖玻片
（两片）
,
盖上皿盖,
外用纸包扎,
高压灭菌
（
9.8×
10
4
Pa
）
20
分钟后,
60
℃烘箱干燥,备用.

2.
取菌接种：用接种环挑取少量待观察的霉菌孢子,置于湿室的载玻片上,每
张载玻片可接同一菌种的孢子两处.
接种时只要将带菌的接种环在载玻片上轻轻
碰几下即可.（接种量要少,以免培养后菌丝过于稠密而影响观察）

3.
加培养基：用无菌细口滴管吸取少许融化并冷却至
45
℃的培养基,滴加到载
玻片的接种处,培养基应滴得圆而薄,直径约为
0.5cm
（滴加量一般以
1/2
小滴
为宜）,注意无菌操作.

4.
加盖玻片：在培养基未彻底凝固前,用无菌镊子将皿内的盖玻片盖在琼脂薄
层上,
用镊子轻压盖玻片,
使盖玻片和载玻片之间的距离相当接近,
但不能压扁.
（盖玻片不能紧贴载玻片,
要彼此留有小缝隙,
一是为了通气,
二是使各部分结
构平行排列,易于观察.）

5.
倒保湿剂：每皿倒入约
3mL 20%
的无菌甘油,使皿内滤纸完全湿润,以保持
皿内湿度,盖上皿盖.制成载玻片湿室,
28
℃培养.观察：将培养好的载玻片取
出,置于显微镜下直接观察.