怎样利用印三酮对氨基酸定量

来源：学生作业帮助网编辑：六六作业网时间：2024/11/25 05:02:02

怎样利用印三酮对氨基酸定量怎样利用印三酮对氨基酸定量怎样利用印三酮对氨基酸定量1茚三酮配制：称0.6g茚三酮,加入15毫升正丙醇,溶解.再加入30毫升正丁醇,60毫升乙二醇,最后加入PH5.4的乙醇-

怎样利用印三酮对氨基酸定量
怎样利用印三酮对氨基酸定量

怎样利用印三酮对氨基酸定量
1 茚三酮配制：称0.6g茚三酮,加入15毫升正丙醇,溶解.再加入30毫升正丁醇,60毫升乙二醇,最后加入PH5.4的乙醇-乙酸钠缓冲液9毫升,混匀,4摄氏度棕色试剂瓶保存,可保存十天.
2 PH5.4的乙醇-乙酸钠缓冲液：54.4克乙酸钠加入100毫升无氨蒸馏水,加热至沸腾,使体积蒸发至60毫升左右.冷却,加入30毫升冰醋酸,用无氨蒸馏水定容至100毫升.
3 氨基酸标液：称80摄氏度烘干的亮氨酸46.8毫克,用10%异丙醇定容至100毫升,为1毫摩尔/升的标准氨基酸储备液,冰箱保存.从中取5毫升,蒸馏水定容至50毫升,为5微克/毫升氨基酸标准液.
4 氰化钠储备液：称取490毫克,溶于一升无氨蒸馏水,为0.01摩尔/升.
5 10%乙酸
6乙酸-氰酸盐缓冲液：0.01摩尔/升氰化钠20毫升,用乙醇-乙酸钠缓冲液定容至一升.
7标线
管号 1 2 3 4 5 6
氨基液标液（毫升）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1
无氨蒸馏水（毫升）2 1.8 1.6 1.4 1.2 1
茚三酮（毫升） 3 3 3 3 3 3
乙酸-氰酸盐缓冲液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
每管游离氨基酸含量（微克）
0 1 2 3 4 5
加完试剂后,沸水中加热15分钟,取后后迅速冷却,并不时摇动,呈现蓝紫色时,用60%乙醇定容至20毫升.摇匀,570纳米测定吸光度.
计算：
含量（微克/100克）=C*VT*100/（VS*W）
C：从标线上查得的含量微克
VT：样品总体积毫升
VS：测定时取用的样品体积毫升
W：样品鲜重克
得到标准曲线再将待测氨基酸溶液进行上述反应,根据吸光度值计算氨基酸含量

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