组织匀浆制备时因注意哪些事项?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/17 14:34:48
组织匀浆制备时因注意哪些事项?
组织匀浆制备时因注意哪些事项?
组织匀浆制备时因注意哪些事项?
1、取组织块（0.2g~1g）最少可到2～5mg,在冰冷的生理盐水中漂洗,除去血液,滤纸拭干,称重,放入5或10ml的小烧杯内
2、用移液管量取预冷的匀浆介质（ph7.4,0.01mol/L Tris-HCL, 0.0001MOL/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖0.8％的氯化钠溶液）或者用0.86％冷生理盐水,匀浆介质或生理盐水的体积总量应该是组织块重量的9倍,用移液管或移液器取总量的2/3的匀浆介质或生理盐水于烧杯中,用眼科小剪尽快剪碎组织块（天然时操作要在冰水浴中进行,将盛有组织的小烧杯放入冰水中）.
3、匀浆的方式有多种：手工匀浆、机器匀浆、超声匀浆、反复冻融.
手工匀浆：将剪碎的组织倒入玻璃匀浆管中,再将剩余的1/3匀浆介质或生理盐水冲洗残留在烧杯中的碎组织块,一起倒入匀浆管中进行匀浆,左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次（6～8分钟）,充分研碎,使组织匀浆化.
机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000r/min上下研磨制成10％组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10秒/次,间隙30秒,连续3～5次,在冰水中进行）,皮肤、肌肉组织等可延长匀浆时间.
超声粉碎：用超声粉碎机进行粉碎,可用Soniprep150型超声波发生器以振幅14微米超声处理30秒使细胞破碎,也可用国产超声波发生仪,用40安培,5秒/次,间隙10秒反复3～5次.
反复冻融：培养或者分离的细胞可以用以上的方法匀浆,也可以反复冻溶3次左右（即让细胞加适量的低渗液或者双蒸水放低温冰箱中结冰,溶解,再结冰,再溶解,反复3次左右）,但有部分酶活力会受影响.
取少量组织匀浆做涂片（直接涂片、染色均可）,显微镜下观察细胞是否磨破,若没有破则可以延长匀浆时间或增加冻融次数.
4、将制备好的10％匀浆用普通离心机或低温低速离心机3000r/min左右离心10～15分钟,若检测ATP酶,则只需要1000转/分,离心5分钟,将离心好的匀浆留下上清弃下面沉淀.
根据你的实验需要,取适量上清夜进行各种测定.
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