如何使基因在原核生物中表达
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/08 17:34:11
如何使基因在原核生物中表达如何使基因在原核生物中表达如何使基因在原核生物中表达1.获取目的基因:最简单的是直接从cDNA文库找,不然就要自己用mRNA逆转录出cDNA,然后PCR,电泳检测,回收.2.
如何使基因在原核生物中表达
如何使基因在原核生物中表达
如何使基因在原核生物中表达
1.获取目的基因:最简单的是直接从cDNA文库找,不然就要自己用mRNA逆转录出cDNA,然后PCR,电泳检测,回收.
2.酶切和连接:找一个质粒载体,根据载体的说明书选择内切酶,一般是双酶切.把载体和你的目的片段用一样的酶切了,然后混合了连接.
3、转化:找一种工程菌,把它弄成感受态,把你连接好了的重组质粒和菌混了,让质粒钻到菌里面去.
4、检验(筛选培养):看看质粒进到菌里面没有,目的基因连接到了质粒上了没有,一般是蓝白斑+抗生素抗性+电泳.
5、诱导表达:加入诱导剂,等着菌表达
6、检测,看看产物出来没有,量多少、有没有活性,etc.
完了,具体问题具体分析,思路以上.
可以让真核生物的mRNA为模板,逆转录得到不含内含子的基因片段,再与运载体结合,导入原核生物细胞即可。
如何使基因在原核生物中表达
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谁知道为什么人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性?
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