末端终止法测序的原理和方法

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 02:25:30
末端终止法测序的原理和方法末端终止法测序的原理和方法末端终止法测序的原理和方法末端终止法测DNA序列即SANGER双脱氧链终止法,其原理是:DNA链中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯键连接,合成DNA所用

末端终止法测序的原理和方法
末端终止法测序的原理和方法

末端终止法测序的原理和方法
末端终止法测DNA序列即SANGER双脱氧链终止法,其原理是:
DNA链中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯键连接,合成DNA所用的底物是 2’-脱氧核苷三磷酸.2’,3’ddNTP与普通dNTP不同,它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基.在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中,但由于没有3’羟基,不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键,因此,正在延伸的DNA链不能继续延伸.在DNA合成反应混合物的4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP,链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止竞争,产物是一系列的核苷酸链,其长度取决于引物末端到出现过早链终止位置间的距离.在4组独立酶反应中分别采用4种不同的ddNTP,结果将产生4组寡核苷酸,它们将分别终止于模板链的A、C、G或T位置.