利用末端终止法测定DNA序列需要的成分有是dNTP还是ddNTP.
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/22 08:40:36
利用末端终止法测定DNA序列需要的成分有是dNTP还是ddNTP.
利用末端终止法测定DNA序列需要的成分有
是dNTP还是ddNTP.
利用末端终止法测定DNA序列需要的成分有是dNTP还是ddNTP.
ddNTP是双脱氧核苷酸
双脱氧核苷酸末端终止法简称为Sanger法或末端终止法,该技术的高明之处在于引入了双脱氧核苷三磷酸（2',3'ddTBP）作为链终止剂.与普通dNTP不同的是2',3'ddNTP在脱氧核糖的3' 位置缺少一个羟基,所以,虽然它可以在DNA聚合酶作用下通过其5' 三磷酸基团掺入到正在增长的DNA链中,但由于缺乏3'羟基,2',3'ddNTP无法同后续的dNTP形成磷酸二酯链,于是,DNA链的合成嘎然而止.如果在DNA合成体系的4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP,链延伸将与偶然发生但却高度特异的链终止展开竞争,结果就形成了一系列长短不一的核苷酸链,其长度取决于从用以起始DNA合成的引物末端到出现过早链终止的位置之间的距离.在4组独立的DNA合成体系中分别采用4种不同的ddNTP,就可以产生4组寡核苷酸,每组将产生以一种特异性的ddNTP为末端的不同长度的核苷酸链.经PAGE电泳分离和放射自显影,即可读出被测定的DNA的全部顺序.
末端终止法测DNA序列即SANGER双脱氧链终止法,其原理是:
DNA链中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯键连接，合成DNA所用的底物是 2’-脱氧核苷三磷酸。2’,3’ddNTP与普通dNTP不同，它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中，但由于没有3’羟基，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，因此，正在延伸的DNA链不能继续延伸。在DN...
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末端终止法测DNA序列即SANGER双脱氧链终止法,其原理是:
DNA链中核苷酸以3’,5’-磷酸二酯键连接，合成DNA所用的底物是 2’-脱氧核苷三磷酸。2’,3’ddNTP与普通dNTP不同，它们在脱氧核糖的3’位置缺少一个羟基。在DNA聚合酶作用下通过三磷酸基团掺入到延伸的DNA链中，但由于没有3’羟基，不能同后续的dNTP形成磷酸二酯键，因此，正在延伸的DNA链不能继续延伸。在DNA合成反应混合物的4种普通dNTP中加入少量的一种ddNTP，链延伸将与偶然发生但却十分特异的链终止竞争，产物是一系列的核苷酸链，其长度取决于引物末端到出现过早链终止位置间的距离。在4组独立酶反应中分别采用4种不同的ddNTP，结果将产生4组寡核苷酸，它们将分别终止于模板链的A、C、G或T位置。
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