引物设计如何避免引起移码突变的产生?
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/19 00:56:59
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5‘-端引物的设计是关键.ATG上游的序列不涉及阅读框,所以在5’端HindIII位点到ATG的序列不会带来移码突变.但是在大肠杆菌中核糖体受一段富含嘌呤的SD序列引导从而识别AUG起始密码,核糖体结合位点RBS和起始密码AUG之间的距离以及碱基的组成对翻译的效率有显著影响,在设计的时候要注意.一般建议在ATG上游加入保守序列5'-UAAGGAGGUGA-3'(其中AGGAGG是RBS保守序列),并根据预实验结果调节,如果载体本身已经带了RBS序列就可以不加.同时在ATG与RBS之间要有一定的空间序列(约小于10个碱基),可以采用靶基因ATG上游的序列.这些涉及方法是经验之谈,对每一个基因都需要实验优化.
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