细胞培养如何计数?如何使用计数板,液体选用多大的量,具体怎么样计数?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/19 20:06:07
细胞培养如何计数?如何使用计数板,液体选用多大的量,具体怎么样计数?
细胞培养如何计数?
如何使用计数板,液体选用多大的量,具体怎么样计数?
细胞培养如何计数?如何使用计数板,液体选用多大的量,具体怎么样计数?
一楼的回答雷死人了,我打个趔趄先.
不同品牌和型号的计数板各自设计得略有不同.我常用的玻璃计数板细胞悬液用量是8微升.
以下我搜来的,就是这么回事,附有网址（点击链接看还有配图）：
血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央的一大格作为计数用,称为计数区.计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开）,而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开）,而每个大方格又分成16个小方格.但是不管计数区是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成.
细胞计数板示意图
计数区边长为1mm,则计数区的面积为1mm2,每个小方格的面积为1/400mm2.盖上盖玻片后,计数区的高度为0.1mm,所以每个计数区的体积为0.1mm3,每个小方格的体积为1/4000mm3.
使用细胞计数板计数时,先要测定每个小方格中微生物的数量,再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量.
细胞计数板-使用方法
1．视待测菌悬液浓度,加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍）,以每小格的菌数可数为度.
2．取洁净的细胞计数板一块,在计数区上盖上一块盖玻片.
3．将菌悬液摇匀,用滴管吸取少许,从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多）,让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区,勿使气泡产生,并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液.也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液,以免加盖盖玻片后,造成计数区深度的升高）,然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）.
4．静置片刻,使细胞沉降到计数板上,不再随液体漂移.将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳,先在低倍镜下找到计数区后,再转换高倍镜观察并计数.由于生活细胞的折光率和水的折光率相近,观察时应减弱光照的强度.
5．计数时若计数区是由16个大方格组成,按对角线方位,数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数.如果是25个大方格组成的计数区,除数上述四个大方格外,还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）.为了保证计数的准确性,避免重复计数和漏记,在计数时,对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定.如菌体位于大方格的双线上,计数时则数上线不数下线,数左线不数右线,以减少误差.即位于本格上线和左线上的细胞计入本格,本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中.见下图：即本格中计数细胞为3个.
细胞计数示例
6．对于出芽的酵母菌,芽体达到母细胞大小一半时,即可作为两个菌体计算.每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大,否则应重新操作）,按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量.
7．测数完毕,取下盖玻片,用水将细胞计数板冲洗干净,切勿用硬物洗刷或抹擦,以免损坏网格刻度.洗净后自行晾干或用吹风机吹干,放入盒内保存.
细胞计数板-计数公式
1、16格×25格的细胞计数板计算公式：
细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数
1、25格×16格的细胞计数板计算公式：
细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数