急...请问从尿激酶粗品中提取尿激酶大致生产过程是什么?会产生哪些废弃物?
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/11/14 23:37:35
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操作程序
收集尿液:用特制塑料桶手机男性尿,尿液的新鲜程度与收率和质量关系甚大.尿中蛋白酶在酸性条件下降解尿激酶,血尿和女性尿中含有血红细胞等成分,影响尿激酶的收率和质量,故只用男性尿作原料.尿液最好保存在10℃以下尽快处理.迅速降温(可以用冰或其它方法降温),用5N的NaOH调尿液PH值为9,静置1小时,虹吸上清液,丢弃灰白色的沉淀.
吸附尿激酶:将虹吸的上清液用5N盐酸(HCl)调PH至5.8-6,加1%(W/V)树脂,搅拌吸附1小时,停止搅拌,树脂自然下沉,虹吸,去掉残留尿液,收集树脂.
水洗和洗净:把收集的树脂用自来水洗三遍,然后用无离子水再洗三遍,至尿液无色为止,以0.1M PH6.4 磷酸钠缓冲液(10%体积)搅拌洗净30分,虹吸,去掉上清液.
洗脱:第一次洗脱,用2% NH4OH和1M NaCl洗脱液,按3.5%体积搅拌洗脱1小时,第二次洗脱,用同样洗脱液同样体积洗脱30分,抽滤收集洗脱液,合并两次洗脱液,量出体积.
硫铵沉淀:按洗脱液体积加入固体硫铵,当其达到0.6饱和度时,用5N 盐酸(HCl)调成PH 3,于0-2℃下沉淀6~7小时,以纸浆过滤收集棕色的尿激酶沉淀,抽干后于低温冰柜火冰箱冰室保存.
树脂再生:用2N盐酸(HCl)搅拌洗涤1小时,洗至中性,然后用2N的NaOH搅拌洗涤1小时,洗至中性,最后用2N 盐酸(HCl)搅拌洗涤1小时,洗至中性.
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