pcr仪主要看什么参数
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/25 21:37:22
pcr仪主要看什么参数
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主要是看升降温速度
还有就是温度准确性,热盖温度,实验通量(就是一次可以做多少样品)及其他的附加功能等等
PCR的循环参数1、预变性 模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要,建议加热时间参考试剂说明书,一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。2、循环中的变性步骤 循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可 缩短该步骤时间 变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败。3、引物退火 退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm...
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PCR的循环参数1、预变性 模板DNA完全变性与PCR酶的完全激活对PCR能否成功至关重要,建议加热时间参考试剂说明书,一般未修饰的Taq酶激活时间为两分钟。2、循环中的变性步骤 循环中一般95℃,30秒足以使各种靶DNA序列完全变性,可能的情况下可 缩短该步骤时间 变性时间过长损害酶活性,过短靶序列变性不彻底,易造成扩增失败。3、引物退火 退火温度需要从多方面去决定,一般根据引物的Tm值为参考,根据扩增的长度适当下调作为退火温度。然后在此次实验基础上做出预估。 退火温度对PCR的特异性有较大影响。4、引物延伸 引物延伸一般在72℃进行(Taq酶最适温度)。但在扩增长度较短且退火温度较高时,本步骤可省略 延伸时间随扩增片段长短而定,一般推荐在1000bp以上,含Pfu及其衍生物的衍生设定为1min/kbp。5、循环数 大多数PCR含25-40循环,过多易产生非特异扩增。6、最后延伸 在最后一个循环后,反应在72℃维持5-15分钟.使引物延伸完全,并使单链产物退火成双链。 四PCR中的污染和假阳性 PCR中污染主要来自 1.样品间交叉污染; 2.先前PCR产物遗留
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