谁能提供些淤泥中细菌分析的实验方案我想从钢厂的污水管道的淤泥上提取细菌,分析它们的种类.要比较具体的

谁能提供些淤泥中细菌分析的实验方案我想从钢厂的污水管道的淤泥上提取细菌,分析它们的种类.要比较具体的
谁能提供些淤泥中细菌分析的实验方案
我想从钢厂的污水管道的淤泥上提取细菌,分析它们的种类.要比较具体的

谁能提供些淤泥中细菌分析的实验方案我想从钢厂的污水管道的淤泥上提取细菌,分析它们的种类.要比较具体的
基本思路
先取样,再分离养,最后鉴定
一、取样（所用器皿、工具均为无菌）
用镊子夹取淤泥少许放入烧杯中,加蒸馏水搅拌均匀.
二、培养基的配置
微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水.有的化合物既是碳源又是氮源、能源.生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物,但不一定需要外界补充,有的微生物可以自身合成.在提供上述几种主要营养物质的基础上,培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求.
建议用PDA固体培养基来培养,培养后可在LB固体培养基上划线分离.以下为本实验中培养基配置步骤：
PDA培养基(马铃薯葡萄糖培养基) 马铃薯（去皮）200 g 、葡萄糖20 g、琼脂15～20g、蒸馏水1000 ml ,自然pH.
在PDA培养基配方中也可用蔗糖代替葡萄糖,这样配制的培养基也称为PSA培养基.
(1) 称量 称量去皮马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂15～20 g.
提示：琼脂加入的量取决于琼脂的质量,质量好的15 g就够了,质量差的应适当增加.另外,在夏天气温较高时,适当增加用量.
(2) 将马铃薯切成小块,放入锅中,加水1000 ml,煮沸30 min.用纱布滤去马铃薯残渣.
(3) 将马铃薯滤液放回锅中,加入琼脂,加热熔化.
提示：在琼脂熔化的过程中,需要用玻璃棒不断搅拌,并控制火力不要使培养基溢出或烧焦.
(4) 加入葡萄糖 葡萄糖溶解后,加入适量的水以补充加热过程中损失的水分,定容至1000 ml.
提示：通常在制作培养基的锅内用红蓝铅笔标记出不同体积的刻度,如1 000 ml、2000 ml等,在定容时直接将水加至已标记的刻度即可.
(5) 分装 根据不同的实验目的,可将配制的培养基分装于试管内或三角瓶内.分装试管,其量为管高的1／5,灭菌后制成斜面.分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜.
(6) 加塞 在管口或瓶口塞上棉塞.棉塞要用未脱脂的经弹松的棉花,棉塞可过滤空气,防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发,故在植物病理学研究工作中普遍使用.
正确的棉塞是形状、划、、松紧与管口或瓶口完全适合,过紧时妨碍空气流通,操作不便；过松则达不到滤菌的目的,且棉塞过小往往容易掉进试管内.正确的棉塞头较大,约有1／3在外,2／3在试管内.分装过程中注意不要使培养基沾染在管(瓶)口上以免浸湿棉塞,引起污染.
(7) 包扎 加塞后,将试管用线绳捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳扎好.用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等.
(8) 灭菌 将上述培养基以0.1MPa,121℃,高压蒸气灭菌20 min.
(9) 搁置斜面 将灭菌的试管培养基竖置冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜.
培养基经灭菌后,必须放在37℃温箱培养24h,无菌生长者方可使用.
PDA培养基一般不需要调pH.对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH.如果培养基偏酸或偏碱时,可用l mol／L NaOH或l mol／L HCl溶液进行调节.调节时应逐滴加入NaOH或HCI溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分.
三、灭菌和消毒
1．无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染,实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触.
2．消毒方法：①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体,则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果,然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒.
3．灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法,所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法,所用器械是紫外灯.
4．比较消毒和灭菌：
比较项
理化因素的作用强度
消灭微生物的数量
芽孢和孢子能否被消灭
消毒
较为温和
部分生活状态的微生物
不能
灭菌
强烈
全部微生物
能
5．注意事项：①实验中用的棉花不能用脱脂棉,因脱脂棉易吸水,吸水后容易造成污染.灭菌后,通常在60～80℃烘箱中除去灭菌时的水分；②物品装入高压蒸汽灭菌锅灭菌后,要首先打开排气阀,煮沸并排除锅内冷空气,其目的是有利于锅内温度升高,随后关闭排气阀继续加热,加热结束切断热源后,要使温度自然降低,气压务必降至零时打开锅盖,其目的是防止容器中的液体暴沸；③在用任何器皿转接时,瓶塞和封口膜只能夹在手上,不许放在台面上,接种时要在酒精灯火焰旁操作；④培养基一定不能沾在三角瓶口、试管管口和培养皿壁上,否则容易污染；⑤接种时要胆大心细,动作快捷,这是减少污染的关键；⑥接种后,培养皿必须倒放（盖在下方）在恒温培养箱中,如正放则水蒸气在盖上凝成水滴,滴到接种后的培养基表面,水流扩散会使菌落扩散,就很难形成单菌落了.
四、细菌的分离
2．涂布分离法：先将培养的菌液稀释,通常稀释到10－5 （10的负五次方）～10－7之间,然后取0.1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上,用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养,在适当的稀释度下,可产生相互分开的菌落.通常每个培养皿有20个以内的单菌落最为适合.将每个菌落分别接种在斜面上扩增培养后,再做功能性实验.
划线分离法,方法简单；涂布分离法,单菌落更易分开,但操作复杂些.细菌的两种分离法各有优点,都可采用.
五、菌落和菌种种类的辨认
单个细菌用肉眼是看不见的,但是,当单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时,便会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体,叫做菌落.不同种类的细菌所形成的菌落在大小、形状、颜色、光泽度、透明度等方面具有一定的特征.
细菌的菌落表面一般是光滑而湿润的,有黏稠性,多数透明或半透明,但也有细菌的菌落表面是干燥、有褶皱的；放线菌由于有纤细的菌丝并可产生孢子,所以菌落表面是紧密的绒状、坚实多皱,长孢子后就成粉末状,由于菌丝和孢子有多种色素,所以在菌落培养基底部和菌落表面都有不同的颜色,菌落不易用接种环挑动；酵母菌落类似于细菌菌落,表面光滑而湿润,有黏稠性但大多呈乳白色,少数呈红色.
如果菌落无法辨认,只有借助于显微镜观察.在显微镜下细菌一般为杆状、球状和弧状,直径都在1um左右；放线菌菌丝是没有横隔的分枝丝状体,气生菌丝顶端分裂成串状孢子,孢子丝有直线形、螺旋状、弯曲式或轮生等；酵母有卵圆型或丝状,但卵圆形细胞大于细菌,直径约5~7um.