质粒酶切我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题.我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/26 05:15:05
质粒酶切我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题.我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以质粒酶切我最

质粒酶切我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题.我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以
质粒酶切
我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题.我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以,琼脂糖浓度是多少.

质粒酶切我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题.我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以
应该能的,没有酶切的载体有很大一部分是超螺旋的,会跑得比本来的大小快,酶切结束后就线性化了.
你在做连接时加一个只加载体不加insert的对照,如果对照不长的话证明载体切得没问题.你就多做几个载体和Insert的比例,4度连接过夜,一定能长.
另外,insert可以多加一点

你怀疑你的质粒没切开?
要是没切开的话,做转化的时候会长出很多的菌落,如果没有,那说明你的质粒切开,但是没连接上。
开始的酶切应该选择比较好的公司的酶。你在检查下你的酶切位点设计的有没问题
你还可以找别人要别人连接的其他片段的质粒,(你的酶切位点没有被破坏就好),你再酶切的时候就能看出有没切开
如果你要看有没有切开,1%的跑的时间长点应该也能看到区别吧...

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你怀疑你的质粒没切开?
要是没切开的话,做转化的时候会长出很多的菌落,如果没有,那说明你的质粒切开,但是没连接上。
开始的酶切应该选择比较好的公司的酶。你在检查下你的酶切位点设计的有没问题
你还可以找别人要别人连接的其他片段的质粒,(你的酶切位点没有被破坏就好),你再酶切的时候就能看出有没切开
如果你要看有没有切开,1%的跑的时间长点应该也能看到区别吧

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质粒酶切我最近在做连接,总是连不上,所以我想分析是哪步出问题.我想将酶切完的质粒载体与未酶切的质粒跑电泳看是否酶切成功,但不知道跑电泳能不能分辨出来(质粒大小10kb-12kb),如果可以 各位最近我在做连接转化,遇到了问题,我的产物长很少的菌,但质粒长的满满的,说明感受态没有问题不知道怎么弄了,请各位帮我分析下吧. 天根质粒小提试剂盒提大肠杆菌质粒,浓度偏低的原因?最近在做载体构建,好不容易检测到了阳性克隆,准备摇菌提质粒进行酶切鉴定,进而测序.摇菌12-16小时后 用天根小提质粒试剂盒提取质粒, 最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍, 为什么我的目的基因连接克隆载体转化、提质粒后,酶切鉴定正确,而质粒PCR和菌液PCR鉴定都不正确呢?着急加点 kml?但是我转化后菌落长的还可以啊.酶切目的带在1000左右,质粒PCR在750左右了 我做质粒的单酶切、与目的片段连接、转化,老是没有菌长,转化过程、感受态没问题,我怀疑是连接的问题,现在我直接把质粒酶切回收后不加目的片段,直接让它自连,也不长菌,开始用的Fermenter 如果胶回收后的质粒的浓度,在正常范围内,那么是不是说明我质粒酶切完全了? 我做质粒酶切实验,需要大量质粒.从含抗生素的平板中挑菌后接种,然后在试管里面培养过夜进行小提质粒.我做质粒酶切实验,需要大量质粒。从含抗生素的平板中挑菌后接种,然后在试管里 最近我在升压电路,tl494,uc3842控制的,隔离的,非隔离的都做了,升压能升上去,可是总是带不起负载.而且一带负载电压会降的好多,所以效率不是很高, 质粒和目的基因片段分别双酶切(bamh1,xba1)连接后电转感受态细胞,同时将质粒酶切回收的片段转化做对照质粒和目的基因片段分别双酶切(bamh1,xba1)连接后电转感受态细胞,同时做对照:质 不知哪家公司可以做质粒转染细胞?我最近构建完质粒,正在做质粒转染细胞,可是发现转染后细胞死亡率高,转染效果不理想,考虑要不要改做慢病毒感染,不知哪家公司可以做? SDS碱裂解法质粒DNA小量提取最近在做质粒DNA的提取,做到最后,加入TE还有不容的沉淀,请高手指导一二, 我最近在做商务英语听力的时候总是听不明白,想问下商务英语听力怎么学比较好? 在做英语和语文,政治题中遇到的困难我总是在做题中,总是带上我的主观思想,所以做的总是和答案不一样,怎样在作题过程中不带自己的主观想象 很大的质粒如何酶切连接,如载体13k,片段3k 限制行内切酶切割质粒和目的基因后,目的基因是怎么和质粒连接的?就是只有一种切割酶的时候,切完了以后目的基因和质粒是怎么连的?这个问题我不太懂.可能说的不是很清楚.额.就是类似于 最近在做转化实验,转化到大肠杆菌里面,请问一下什么是假阳性啊是不是指载体没有与目的基因连接,就直接进行转化,如果是这样,在进行“蓝白斑”筛选时,原理是当外源片段插入到载体质粒 用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒总是只有一条带怎么回事?我用XhoⅠ和NdeⅠ双酶切pET30a质粒,但是酶切后电泳检测总是只有一条带,感觉没有切开,我已经重复酶切多次,而且也用来连接过,事实证明