最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍,
来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/26 02:20:36
最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍,最近做了连接
最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍,
最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒
然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍,PCR后拖带情况好转,现在的问题就是我上样9微升跑胶,目的条带很浅,这是为什么啊?
最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍,
“单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒”,首先你的表达有误,单酶切可以切开,说明目的基因有连接上,那么重组载体该是比空载大的.
质粒稀释100倍后PCR,有目的条带,也说明了是阳性克隆.有拖带,你可以把退火温度提高试试.后面上样9ul目的条带很浅,应该是你稀释倍数太高了.我一般是不稀释的,直接PCR,不过得看你提取质粒时加多少体积的水溶.
我觉得不需要另外转入空载,PMD18-T vector的连接率挺高的.只要挑取阳性克隆抽质粒,经酶切、PCR后有目的条带就可以拿去测序了.如果PMD18-T vector只作为中间载体,可亚克隆到其他载体
转入空载质粒、
转入空载质粒、含有插入的DNA片段、以及少量具有抗性的菌落在选择培养基上受到的选择压不同,生长速率不一致。
T载体转化不难做的,先B-W筛选,再做菌液PCR,然后提质粒做双酶切鉴定。
最近做了连接转化,挑平板上的菌落摇菌后提质粒,单酶切可以切开,而且质粒的大小明显小于空质粒然后用质粒稀释100倍后进行PCR,可以看到目的条带,但是有拖带.然后我继续将质粒稀释至500倍,
菌落PCR有关问题?我们做了转化实验,将转化后的菌涂在含Kan抗性的平板上,为什么挑取能生长的菌落做PCR没有目的条带?
转化的大肠杆菌菌落周围为什么长出好多小菌落我做的大肠杆菌转化,涂平板培养了二十几个小时,有的菌落外面有些小菌落,后来平板放在4度冰箱,几乎每个菌落周围都长出了很多的小菌落,是
转化涂板后,如果平板上没有菌落长出或者只有极少数的菌落长出,分析其可能存在的原因?
感受态细胞的制备及转化平板上菌落的多少跟什么原因相关
如何确定平板上大的菌落为单菌落
菌落PCR做了10次还是不成功···我是第一次做菌落PCR,但是做了10次都没成功···用菌是JM83菌,在平板上培养成菌落的,做的时候就挑一点菌进体系中.我的体系是 mix 混合液(里面包含了dNTP、buff
我做菌落总数实验的时候、平板上第一个稀释度两个平板多不可计、第二个稀释度两个平板没长菌,我怎么报数?
菌落总数如果做了三个稀释度分别是(378,347)(170,110)(102,90)该如何求菌落总数?例2:如果做了三个稀释度三个平板上的都是多不可计,我需要数最高平板稀度的菌落数吗?还是直接写成多
菌落总数如果做了三个稀释度分别是(378,347)(170,110)(102,90)该如何求菌落总数求大神帮助例2:如果做了三个稀释度三个平板上的都是多不可计,我需要数最高平板稀度的菌落数吗?还是
大肠杆菌转化后长得很慢,提质粒跑电泳条带很淡我是用的一种基因缺陷性大肠杆菌做感受态,然后将连接好的质粒转入(连好的质粒里含有缺少的基因片段),涂平板以后需要24h才有菌落长出,挑
我在平板计数琼脂上做的细菌培养,可是整个平皿长满了白色的菌落,没有明显界限,为什么啊
转化大肠杆菌平板出现卫星菌落是怎么回事
转化pET32a一个菌落也不长是什么原因啊我在做分子克隆,克隆了四个片段,要在pET32a载体上表达,可是酶切,连接,转化大肠杆菌BL21以后一个菌落也不长,我已经试过各种载体和目的片段的比例,而
做蓝白斑筛选为什么不长菌?最近做蓝白斑筛选时,平板上一点菌落都没有长出来,不知道什么原因.操作过程应该问题不大,已经成功做过很多次.怀疑是感受态的问题,放在-80度保存了二个多月,
在做菌落总数测定时所有稀释度的平板都没菌落,都做了两次了还是不敢相信自己的眼睛啊?
平板计数琼脂上霉菌生长过快!最近做一个鱿鱼卷的菌落总数的实验,当然这不是真的鱿鱼卷,只是拿面做的小食品,也就是孩子们常吃的零食.在1:10的稀释度下长了很多霉菌,细菌数量倒是不多.
经过选择培养分离,平板上出现了30—300个单个细胞菌落.下列描述中,正确的是()A.每个菌落都是由一个细菌形成的B.每个菌落可能由2—3种细菌形成C.平板上出现30个菌落最好D.平板上出现30个