帮我设计个实验,ELISA的..实验内容是测鸡血液中IgG的含量,现有药品有分次提取的待测鸡血；鸡IgG；兔抗鸡IgG.....
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/08 03:51:56
帮我设计个实验,ELISA的..实验内容是测鸡血液中IgG的含量,现有药品有分次提取的待测鸡血；鸡IgG；兔抗鸡IgG.....
帮我设计个实验,ELISA的..
实验内容是测鸡血液中IgG的含量,现有药品有分次提取的待测鸡血；鸡IgG；兔抗鸡IgG...
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帮我设计个实验,ELISA的..实验内容是测鸡血液中IgG的含量,现有药品有分次提取的待测鸡血；鸡IgG；兔抗鸡IgG.....
步骤：
1包被：用包被缓冲液稀释待测鸡血（可以稀释成不同的浓度,如1:100,1：1000,1：10000),包被液稀释鸡IgG（要做背比稀释）,100ul/孔,4度过液.
2封闭：3%BSA的PBST,100ul/孔,4度过夜或37度1h.
3一抗：用含1%BSA的PBST稀释兔抗IgG（比例按照抗体的说明书）100ul/孔,37度1h
如果这个抗体应该是HRP标记的.可以直接加底物反应,如果不是还需要再加一步孵育HRP标记的抗兔抗体.
4底物显色：加TMB显色液（这个公司都有卖的）100ul/孔.避光10-15分钟.
5终止：2M硫酸终止.
6酶标仪检测.
最后根据标准品作标准曲线,样品的OD带入标准曲线计算浓度.
这个很复杂哎...因为鸡血里面蛋白也是很多的，不知道会不会有cross banding，所以事先还得纯化鸡血得到IgG...如果不考虑这个那就是用标准的鸡IgG，配成已知浓度的，固化，一抗，二抗嘛的，做elisa,做出不同浓度的吸光度，然后得到吸光度和浓度关系的标准曲线。接下来把样品也做了，测吸光度，和标准曲线的比较，得出浓度。至于elisa的具体操作你还是自己看实验指导吧......
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这个很复杂哎...因为鸡血里面蛋白也是很多的，不知道会不会有cross banding，所以事先还得纯化鸡血得到IgG...如果不考虑这个那就是用标准的鸡IgG，配成已知浓度的，固化，一抗，二抗嘛的，做elisa,做出不同浓度的吸光度，然后得到吸光度和浓度关系的标准曲线。接下来把样品也做了，测吸光度，和标准曲线的比较，得出浓度。至于elisa的具体操作你还是自己看实验指导吧...
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Elisa的实验很常用，先准备标本，再用试剂盒测试。这试剂盒很好买，你可找runwelltac的公司，我就是从他们那买的。他会提供说明步骤