我现在要做免疫共沉淀检测蛋白质与蛋白质之间的相互作用,我是个新手,从来没做过,我看过一些文献,文献上说的做法大都不太一样,我有点糊涂了.我想问一下,是不是先提蛋白,然后做免疫沉

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 11:43:30
我现在要做免疫共沉淀检测蛋白质与蛋白质之间的相互作用,我是个新手,从来没做过,我看过一些文献,文献上说的做法大都不太一样,我有点糊涂了.我想问一下,是不是先提蛋白,然后做免疫沉我现在要做免疫共沉淀检测

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我现在要做免疫共沉淀检测蛋白质与蛋白质之间的相互作用,我是个新手,从来没做过,我看过一些文献,文献上说的做法大都不太一样,我有点糊涂了.我想问一下,是不是先提蛋白,然后做免疫沉淀(加入抗体)做电泳看看蛋白质之间是否有作用就可以了还是需要做更复杂的?请求专业人士解答一下谢谢!

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这个过程简单讲就是这么几步:

抽蛋白

挂抗体到beads上,做成有亲和力的柱子(其实所谓“柱子”就是带有抗体的beads装到Ep管里)

抽出来的蛋白去和柱子孵育,抗体识别的蛋白和与此蛋白互做的蛋白就挂到柱子上了

洗涤,将抗体不能结合的蛋白洗掉

洗脱,可以用蛋白电泳上样缓冲液将beads上的抗体,蛋白,蛋白结合蛋白一起洗下来

电泳

WB检测

之所以叫免疫沉淀,是因为利用了抗体的亲和力,所以叫免疫,而沉淀的意思就是指,抗体挂到beads上,液体里面的物质用固相的beads可以分离出来,所以叫做沉淀.

而上面的7个步骤又会根据实际试验的情况发生变化.所以你看到文献上怎么做的人都有.

如果感兴趣,我建议你可以先读一些general的protocol,例如:http://www.piercenet.com/files/TR0064-Immunoprecipitation-guide.pdf ,再根据自己的实际状况或者是实验的结果再进行选择.

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