什么是双层琼脂培养法?培养细胞时是什么样?

来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/16 13:03:01
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什么是双层琼脂培养法?培养细胞时是什么样?

什么是双层琼脂培养法?培养细胞时是什么样?
用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能
原理:噬菌体的效价即1mL样品中所含侵染性噬菌体的粒子数.效价的测定一般采用双层琼脂平板法.由于在含有特异宿主细菌的琼脂平板上,一般一个噬菌体产生一个噬菌斑,故可根据一定体积的噬菌体培养液所出现的噬菌斑数,计算出噬菌体的效价.此法所形成的噬菌斑的形态、大小较一致,且清晰度高,故计数比较准确,因而被广泛应用.
方法:双层琼脂平板法
1 倒下层琼脂
融化下层培养基,倒平板（约10mL/皿）待用.
2 倒上层琼脂
融化上层培养基,待融化的上层培养基冷却至50℃左右时,每管中加入敏感指示菌 (大肠杆菌) 菌液0.2mL,待检样品液或上述噬菌体增殖液0.0.5mL,混合后立即倒入上层平板铺平.
3 恒温培养
30℃恒温培养6～12h观察结果.
4 观察结果
如有噬菌体,则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑——¬¬¬¬噬菌斑

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