请问细胞裂解液如何配制,细胞裂解之后有粘滞的团块形成,要如何避免啊?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/23 17:01:44
请问细胞裂解液如何配制,细胞裂解之后有粘滞的团块形成,要如何避免啊?
请问细胞裂解液如何配制,
细胞裂解之后有粘滞的团块形成,要如何避免啊?
请问细胞裂解液如何配制,细胞裂解之后有粘滞的团块形成,要如何避免啊?
博凌科为生物科技-为你一、试剂准备1、新鲜配制冷的 RIPA 裂解缓冲液:150 mM NaCL1% NP-40 (去垢剂) 0.1% SDS (去垢剂)2ug/ml Aprotinin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)2ug/ml Leupeptin (蛋白酶抑制剂) (使用前加入)1 mM PMSF (蛋白酶抑制剂)1.5 mM EDTA (蛋白酶抑制剂)1mM NaVanadate (磷酸脂酶抑制剂)(任选)以上所有试剂均按比例溶于150 mM NaCL溶液中.2、冷的PBS 中加入 1 mM PMSF1.5 mM EDTA1mM NaVanadate （钒酸钠）(任选)3、对数期生长状态佳的细胞,75cm至少3-4瓶（90%以上生长面积）.二、实验步骤1、将长满细胞的培养瓶放置在冰上,用吸液管吸出培养液.加入足够的冷的 PBS在培养瓶中充分洗涤细胞表面,以洗去瓶中残留的培养基,倒掉PBS ,重复以上操作2-3遍.在最后一次洗涤中尽可能吸干残留的PBS,尽量在冰上操作.2、 向培养瓶中加入冷的RIPA 裂解缓冲液 (每75cm2 培养瓶加1ml).然后用细胞刮子沿着瓶壁开始刮细胞,如果所需要刮的同种细胞有多瓶,则将第一瓶刮下的细胞液吸出转入下一瓶中继续刮 (由于处理后的细胞裂解液较粘稠,所以宜用直径大点的吸液管吸取).3、 吸出刮好的细胞裂解液置于14ml 离心管中 （置于冰上）,然后重复步骤2以刮取剩下的细胞.4、 尽可能将多的细胞裂解液收集到14ml的离心管中,样品插入冰盒进行超声,超声强度以不产生泡沫为准,超声每次2-3秒,重复3-4次.如仍有细胞碎片或沉淀,应离心10000rpm,10分钟,留取上清.5、 取出小量细胞裂解液测其蛋白浓度（用Biorad Bradford 试剂盒或紫外分光光度计,在A280测定）,分装保存在 -70℃.