求易错PCR具体步骤
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/15 12:38:08
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求易错PCR具体步骤
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易错PCR 是在采用DNA聚合酶进行目的基因扩增时,通过调整反应条件,如提高镁离子浓度、加入锰离子、改变体系中四种的dNTPs浓度或运用低保真度DNA聚合酶等,来改变扩增过程中的突变频率,从而以一定的频率向目的基因中随机引入突变,获得蛋白质分子的随机突变体.其关键在于对合适突变频率的选择,突变频率太高会导致绝大多数突变为有害突变,无法筛选到有益突变;突变频率太低则会导致文库中全是野生型群体.理想的碱基置换率和易错的最佳条件主要依赖于突变的DNA片段的长度. 通常,经一次突变的基因很难获得满意的结果,由此发展出连续易错 PCR(sequentialermr-PronePCR)策略.即将一次扩增得到的有益突变基因作为下一次扩增的模板,连续反复地进行随机诱变,使每一次扩增得到的正向突变累积而产生重要的有益突变.由于易错PCR涉及的遗传变化只发生在单一分子内部,故属于无性进化 (asexualevolution).它虽然可以有效的产生突变,且操作方法简单,但其一般只适用较小的基因片段,且突变碱基中转换高于颠换,应用范围较为有限.