什么是硫酸苯酚法,测定多糖的详细步骤是什么,急用你给的答案表27-1在哪啊，另外计算式在哪啊
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/11/18 04:46:49
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一）苯酚法测定可溶性糖
【实验原理】
植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖.苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下,脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物,在10－100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比,且在485nm波长下有最大吸收峰,故可用比色法在此波长下测定.苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定,方法简单,灵敏度高,实验时基本不受蛋白质存在的影响,并且产生的颜色稳定160min以上.
【实验仪器及试剂】
1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量.
2．试剂：
（1）90％苯酚溶液：称取90g苯酚（AR）,加蒸馏水10mL溶解,在室温下可保存数月.
（2）9％苯酚溶液：取3mL 90％苯酚溶液,加蒸馏水至30mL,现配现用.
（3）浓硫酸（比重1.84）.
（4）1％蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取1.000g.加少量水溶解,移入100mL容量瓶中,加入0.5mL浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度.
（5）100ug/L蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液1mL加入100mL容量瓶中,加水定容.
【实验步骤】
1．标准曲线的制作： 取20mL刻度试管11支,从0－10分别编号,按表27－1加入溶液和水,然后按顺序向试管内加入1mL 9％苯酚溶液,摇匀,再从管液正面以 5－20s.加入5 mL浓硫酸,摇匀.比色液总体积为8 mL,在恒温下放置30min.显色.然后以空白为参比,在485nm波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程.
2．可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10－0.30g,共3份,分别放入3支刻度试管中,加入5-10mL 蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min（提取2次）,提取液过滤入25mL容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度.
3．测定吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次）,加蒸馏水1.5mL,同制作标准曲线的步骤,按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液,显色并测定光密度.由标准线性方程求出糖的量,按下式计算测试样品中糖含量.
式中：C一标准方程求得糖量（ug）
α一吸取样品液体积（mL）
V－提取液量（mL）
n一稀释倍数
W一组织重量（g）
可溶性糖含量（％）＝从标准曲线查得糖的量（μg）×提取液体积（ml）×稀释倍数/[测定用样品液的体积(ml)×样品重量(g)×106]×100