已知一段基因片段,如何克隆之前的片段,也就是如何克隆已知基因的启动子?启动子一般有多少BP?
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/23 13:02:21
已知一段基因片段,如何克隆之前的片段,也就是如何克隆已知基因的启动子?启动子一般有多少BP?
已知一段基因片段,如何克隆之前的片段,也就是如何克隆已知基因的启动子?启动子一般有多少BP?
已知一段基因片段,如何克隆之前的片段,也就是如何克隆已知基因的启动子?启动子一般有多少BP?
不知道你要克隆什么基因的启动子?
一般而言,如果是与模式生物亲缘关系较近的生物中克隆某基因的启动子,可以查询模式生物该基因的sequence viewer相关信息,这个在拟南芥数据库以及NCBI中都可以实现.相关操作内容可以参阅本论坛中关于NCBI使用方法的一些帖子.
查到sequence viewer后,选取该基因5‘UTR上游2000bp的序列作为你的目的序列,然后与你的基因的已知序列（我想,在克隆启动子之前,你应该至少已经有你的目的基因的CDS了吧?）ATG下游序列进行拼接,然后利用你查到的序列设计F引物,利用你已知的目的基因序列设计R引物,再按照常规PCR进行后续试验即可!
对于那些与模式生物亲缘关系较远的生物而言,我建议你在CNKI上输入“启动子克隆”为关键词查一下,你会发现,应该有很多人总结过这方面的技术的!
另外,我这还有几种方法,需要M我
看来genome肯定还没有测序，呵呵
如果有Genome文库可以筛文库，
如果什么都没有，TAIL-PCR，I-PCR，接头PCR用的最常规了，不过有试剂盒卖，你咨询一下公司！
启动子有多长，呵呵，这没有一个人敢确定的说。一般核心启动子很短，但有些增强子元件可以距离基因很远，研究一个未知的启动子可以尽量长一些，但是太长会很不好操作的。所以像ls那位兄弟说的，一般人先取2k...
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看来genome肯定还没有测序，呵呵
如果有Genome文库可以筛文库，
如果什么都没有，TAIL-PCR，I-PCR，接头PCR用的最常规了，不过有试剂盒卖，你咨询一下公司！
启动子有多长，呵呵，这没有一个人敢确定的说。一般核心启动子很短，但有些增强子元件可以距离基因很远，研究一个未知的启动子可以尽量长一些，但是太长会很不好操作的。所以像ls那位兄弟说的，一般人先取2k左右试试。
祝早日成功！
收起
你指的克隆之前的片段应该是指5'端吧？5'端可以使用专门的试剂盒来克隆，试剂盒里会有专用的引物，这段专用引物对应的序列是在做5'RT-PCR的时候连接上去的。