一个质粒携带有氨苄青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因.利用卡那霉素抗性基因内部的EcoRI酶切位点进行人类生长激素基因的克隆.二者连接后转化对两种抗生素都敏感的大肠杆菌菌株.如何

来源:学生作业帮助网 编辑:六六作业网 时间:2024/12/23 16:18:27
一个质粒携带有氨苄青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因.利用卡那霉素抗性基因内部的EcoRI酶切位点进行人类生长激素基因的克隆.二者连接后转化对两种抗生素都敏感的大肠杆菌菌株.如何一个质粒携带有氨苄青霉素

一个质粒携带有氨苄青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因.利用卡那霉素抗性基因内部的EcoRI酶切位点进行人类生长激素基因的克隆.二者连接后转化对两种抗生素都敏感的大肠杆菌菌株.如何
一个质粒携带有氨苄青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因.利用卡那霉素抗性基因内部的EcoRI酶切位点进行人类生长激素基因的克隆.二者连接后转化对两种抗生素都敏感的大肠杆菌菌株.如何鉴别出那些细菌获得了质粒?那些细菌含有的质粒上携带有人类生长激素基因?

一个质粒携带有氨苄青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因.利用卡那霉素抗性基因内部的EcoRI酶切位点进行人类生长激素基因的克隆.二者连接后转化对两种抗生素都敏感的大肠杆菌菌株.如何
按照你的表述,EcoRI酶切位点是在卡那霉素抗性基因内部?
那么,如果这个抗性基因插入了你的目的基因,那么这个基因就被破坏,也就失去了卡那抗性.
所以,插入了目的基因的质粒,应该是只有氨苄抗性的.所以转化之后涂平板,不能用双抗,只能用氨苄抗性.
要鉴别是否插入目的基因,很简单:
1,菌落pcr:从转化平板上随机挑选几个菌落,用普通pcr体系,以菌体为模板,做pcr,然后跑胶鉴定.(我的经验,这一步阳性了就基本准了)
2,从菌落pcr阳性菌内提质粒酶切鉴定.(这个最准)
3,如果你实在是要求用抗性来筛(其实抗性筛选不是很准),你用两种平板,一种是amp平板(也就是转化用的平板),一种是amp+kan平板,你用接种环或者灭过菌的牙签,从amp转化平板上的菌落点一下,再在amp
+kan平板上原位点一下,培养.
如果同一个菌落,只能在amp上长,而不能在双抗上长,就可能是重组质粒.

一个质粒携带有氨苄青霉素抗性基因和卡那霉素抗性基因.利用卡那霉素抗性基因内部的EcoRI酶切位点进行人类生长激素基因的克隆.二者连接后转化对两种抗生素都敏感的大肠杆菌菌株.如何 为什么质粒PUC18携带氨苄青霉素抗性基因可以筛选重组质粒 氨苄青霉素抗性基因在质粒DNA上叫什么 puc19质粒含有什么抗性基因?克隆时用氨苄青霉素进行筛选可以不? ,质粒上有四环素抗性基因和氨甸氢酶素抗性基因,把目的基因插入四环素抗性基因所在的位置,为什么还要用氨甸青霉素来检测? 质粒一定有四环素抗基因和起码是青霉素抗性基因吗 筛选含目的基因的受体细胞时,质粒上必须携带抗生素抗性基因吗 基因工程中常用的是质粒 有抗性标记基因?质粒至少有一个限制酶切点? 生物学基因工程重组子筛选质粒有氨卞青霉素抗性基因和四环素抗性基因受体细胞没有氨卞青霉素抗性基因和四环素抗性基因重组子没有氨卞青霉素抗性基因有四环素抗性基因请问加青霉素 是每个大肠杆菌中都含有氨苄青霉素抗性基因吗 大肠杆菌里面有质粒吗?如果大肠杆菌有质粒的话,那做转化的感受态细胞里有没有质粒啊?如果有质粒是不是也有抗性基因?那蓝白筛选还有意义吗? 1.质粒导入 的几率很小,那么目的基因转化到质粒中的几率是多少?不是100%吗?2.根据第一个问题,那么就是说目的基因导入,可以有2种情况?(1)无目的基因的质粒.(2)含目的基因和抗性基因的 基因工程中质粒上有抗生素目的是质粒上常有抗生素的抗性基因 5.下图是某质粒示意图,其中ori为质粒复制所必需的核苷酸序列,amp为氨苄青霉素抗性基因,tet为四环素抗性基因,箭头表示目的基因插入位点.受体大肠杆菌细胞内原来不含有这两种抗生素抗性 SV40质粒是否含有AMP抗性基因? pet28a作载体的重组质粒转入大肠杆菌怎么检测筛选,酶切位点是NdeI和XhoI,可以用氨苄青霉素或蓝白斑筛选?貌似没有抗氨苄青霉素基因啊 四环素抗性基因问题!为什么一个质粒上不含有四环素抗性基因就不能在含有四环素的培养基上生长?既然是抗四环素,为什么不是有这种基因而不能在含有四环素的培养基上生长? DNA RNA 质粒上的基因有何不同比如抗性基因是在质粒上…………