TLC 和 HPLC结果 不一致请问各位有没有遇到过这样的情况：有A和B两种物质,TLC检测时在254nmUV条件下,B有很强的吸收,可是A几乎看不到,可是在HPLC检测时254nmUV检测器下,却是A的吸收很强,B的几乎没
来源：学生作业帮助网 编辑：六六作业网 时间：2024/12/20 13:05:55
TLC 和 HPLC结果 不一致请问各位有没有遇到过这样的情况：有A和B两种物质,TLC检测时在254nmUV条件下,B有很强的吸收,可是A几乎看不到,可是在HPLC检测时254nmUV检测器下,却是A的吸收很强,B的几乎没
TLC 和 HPLC结果 不一致
请问各位有没有遇到过这样的情况：有A和B两种物质,
TLC检测时在254nmUV条件下,B有很强的吸收,可是A几乎看不到,
可是在HPLC检测时254nmUV检测器下,却是A的吸收很强,B的几乎没有,
而且我也确定A和B的出峰位置没有颠倒,
真是郁闷啊,不知道以哪个检测为准
都是用的紫外检测 也有这个区别吗？
TLC 和 HPLC结果 不一致请问各位有没有遇到过这样的情况：有A和B两种物质,TLC检测时在254nmUV条件下,B有很强的吸收,可是A几乎看不到,可是在HPLC检测时254nmUV检测器下,却是A的吸收很强,B的几乎没
首先要确定A和B物质在紫外下的最大吸收分别是多少,其次是A和B的含量分别是多少.根据你的情况,可以大致分析出A物质在254nm下吸收强度远远大于B物质,而B物质的浓度远大于A物质.
在TLC下,A为微量物质,分辨精度不高,吸收几乎看不到,而B物质虽然吸收不大,单胜在浓度大,可以分辨.
在HPLC下,A物质在分离柱中被富集在一起,加上吸收大,出峰自然强,而B物质虽然浓度大,但吸收不强烈,因此出峰反而较弱.
建议做一下DAD,找一个矫正因子为1的波长来测HPLC.或者用示差折光检测器作分析可能比较省心.
检测设备不同，对同种物质的灵敏度不同。以哪个检测为准要看A，B具体是什么。
你这个肯定是设备问题~或许你用的紫外灯是双波长的.如果HPLC用紫外检测,一般做HPLC之前都要先把样品跑一遍UV 范围基本上都是200-600, 确定了最大吸收以后再调整HPLC检测波长到UV的最高吸收.
按理来说UV/VIs LAMP检测 跟HPLC里面的监测器是一样的原理,不应该存在吸收强度很大的差异. 不知道你跑得样品又没有被污染, 最好的办法 检查展开剂就是跑空白板,然后在UV...
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你这个肯定是设备问题~或许你用的紫外灯是双波长的.如果HPLC用紫外检测,一般做HPLC之前都要先把样品跑一遍UV 范围基本上都是200-600, 确定了最大吸收以后再调整HPLC检测波长到UV的最高吸收.
按理来说UV/VIs LAMP检测 跟HPLC里面的监测器是一样的原理,不应该存在吸收强度很大的差异. 不知道你跑得样品又没有被污染, 最好的办法 检查展开剂就是跑空白板,然后在UV下看看又没有吸收. 还有对于你用的HPLC 你看看你用的是不适反向HPLC吧~一般反向洗脱用的固定向都是C18， 如果是反向洗脱 那出锋的顺序自然是相反的~。
还有一个终极检测办法 哈哈~不知道你研究的sample双键共轭多不多`要是多的话有荧光吸收，跑一下FL 看看~根紫外效果一样的~可以验证UV/Vis结果~
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